Cas9基因敲除质粒的构建

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7、2015-04—27收稿责任编辑王曼)[7]JINL，FAROOKAA．Mechanismofandrogenreceptorac-doi：10．13705／j．issn．1671—6825．2016．01．006靶向PD-L1基因的CRISPR／Cas9基因敲除质粒的构建孙冉冉¨，陈晓龙¨，李娟¨，申中¨，李晶晶¨，阚全程，余祖江)1)郑州大学第一附属医院感染科郑州4500522)郑州大学第一附属医院药学部郑州450052#通信作者，男，1971年5月生，教授，研究方向：重症肝炎和肝癌的综合治疗

8、，E-mail：johnyuem@zzu．edu．cn关键词PD—L1；肿瘤免疫；CRISPR／Cas9；基因敲除中图分类号Q78t摘要目的：构建靶向PD—L1基因的CRISPR／Cas9基因敲除质粒。方法：根据CRISPR／Cas9靶点设计原则，设计并合成靶向PD-L1基因的5对sgRNA序列。为了进一步降低克隆背景和提高构建阳性率，在受体载体中引入毒性蛋白系统(Ccd)。构建pX459一CcdB重组载体，将pX459一CcdB载体进行BbsI酶切，将sgRNA插入到pX459．