实验五农药污染对植物微核产生的诱变效应

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1、实验六农药污染对植物微核（MCN）产生的诱变效应实验内容一、实验目的二、实验原理三、器材与材料四、操作步骤五、实验结果六、思考题一、实验目的1.掌握环境优先污染物的概念；2.了解“三致”物质的潜在危害；3.掌握微核观察和计数的方法。二、实验原理微核，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小在主核1/4以下。三、器材、试剂与材料1．器材光照培养箱、瓷盘、纱布、水浴锅、显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、计数器。2．试剂（1）卡诺氏液：由三份纯酒精和一份冰醋酸混合而成（现用现配）；（2）1.0mol·L-1盐酸

2、；（3）70%酒精；（4）1％醋酸洋红：将50mL45％的醋酸水溶液放人150mL锥形瓶中，文火煮沸，然后徐徐投入0.5g洋红粉末，再煮1～2h，在此溶液中悬一个铁钉，1分钟后取出，使染色剂中略具铁离子(或在溶液冷却后加入1～2滴醋酸铁溶液)以便增加染色效果。将溶液过滤后，置于具玻璃塞的棕色玻璃瓶中备用。（5）用农药磷胺（phosphamidon）与水配置系列溶液：0％（对照）和20％。3.材料吞豆根尖（初生根或次生根）实验材料四、方法与步骤实验流程如图所示：1．材料准备取蚕豆种子，在蒸馏水中浸泡24h，使种子充分吸胀，置于铺有滤纸的瓷盘中并盖上湿纱布，在23±1℃的光照培养箱中培养1～2d

3、，使其长出1.5-3.0cm长的初生根，此时切除初生根以保证侧根的生长发育。2．染毒处理待侧根露白后，随机分组。每组选择10粒种子用配制好的农药溶液染毒处理6h，取出后用蒸馏水冲洗，并移至蒸馏水中修复培养22～26h（两个细胞周期）。3．材料固定取修复培养结束的蚕豆根尖0.5-1cm于卡诺氏固定液中固定12～14h。如需长时间保存，则将样品置于70%酒精中，4℃保存。4．材料解离将固定后的根尖材料用1mol·L-1的盐酸在60℃恒温水浴中解离15～20min。5．制片将解离后的根尖材料用蒸馏水漂洗数次，取出置于载片上，从根冠起切取根尖1～1.5mm，用解剖针捣碎，加1～2滴染液，染色10-1

4、5min。盖上盖片轻压。6．镜检在40×10倍显微镜下，凡小于主核1/4以下的，同主核有相同染色效果的，圆形、椭圆形或其他类似的形状的染色物质都可以算作微核。有丝分裂前期中期后期微核自动识别系统五、实验结果通常每一处理组至少观察5张较好的片子，每张片子至少观察1000个以上细胞。结果有两种表示方法：微核率‰=微核数/观察统计的总细胞数×1000‰微核细胞率‰=具有微核的细胞数/观察统计的总细胞数×1000‰。污染指数（pollutionindex,PI)PI=处理的微核千分率平均值/对照组的微核千分率平均值基本无污染：0

5、3.5；重度污染：PI>3.5六、思考题一、实验中农药引起微核产生的原因是什么？二、磷胺属于哪种类型的农药，该种农药对生物的影响以及在环境中的行为有何特点？