bcr_生物学_自然科学_专业资料

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1、FCM：流式细胞仪的工作原理是使悬浮在液体屮分散的经荧光标记的细胞或微粒逐个通过样品池，同时由荧光探测器捕获荧光信号并转换成分别代表前向散射角、侧向散射角和不同荧光强度的电脉冲信号，经计算机处理形成相应的点图，直方图和加三维结构图像进行分析FRET原诱导的B细胞抗原的引发受体荧光活细胞屮的信号看共振能量转移帕维尔•托拉尔，海圜孙某与SusanK发表皮尔斯结合抗原的于B细胞抗原受体（BCR）的触发信号，最终导致B细胞激活。运用定量荧光共振能量转移成像，我们在此提供的证据表明，BCR是单体上静息细胞的表面上。多价抗原结合聚集的BCR,产生的同时磷酸化并在BCR胞质域从关闭到打开形式的构

2、象变化。值得注意的是，开放构象所需的免疫受体酪氨酸活化基序和连续Src家族激酶活性，但不是激酶S=yk的结合。因此，BCR信号的启动是伴随着诱发可逆的构象变化非常动态的过程Src家族激酶活性。B细胞反应是通过多价抗原的结合启动的B细胞受体（BCRS）,这触发了ulti-信号级联三方共同导致B细胞的活化。很多人都了解了该信号级联的生化细节1-3o然而，现在很少有关的响应的分子性质已知BCR抗原结合的结果信令或时间框架上发生这种反应。BCR的是一个包含一个复杂膜免疫球蛋白（MIG）与短的胞质域该非共价带的二硫化物连接的界源二聚体相关IG-a和IG-B;这些包含在其胞质域immunore

3、ceptor酪氨酸激活基序（ITAMs）的夫妇BCR到信号设备4o多价后最早生化事件抗原结合于BCR包括在洗涤剂溶解性的变化受体的五指示在木地脂质环境的变化受体，在免疫球蛋白一个受体和免疫球蛋白的B磷酸由src激酶家族，主要林恩，以及招募ITAMsSrc同源2结构域的激酶的Syk的磷酸化ITAMs1-3o它可以假定抗原结合导致CON组在BCR的构型变化被“翻译”成可识別变化促进phosphoryla-的BCR胞质域由src家族激酶的ITAMs的重刑和力便的组装信令复杂，因为己建议发生于T细胞抗原配体后受体结合6,7o然而，知之甚少的在BCR的在未刺激的胞质域的结构或活化细胞。没有二

4、级结构是在多肽明显表示的lg-a和体外的gB的胞质结构域8虽然这不是明显这些链小的充分的背景下如何运作在质膜组装BCR。在一部分，理解在BCR信号最早的事件是由conven-依赖有限不能提供一个TIONAL生化和成像方法的时间和长度信令的开始的连续视图秤可用于捕获BCR的第一反应是必要的抗原结合。称取研华高分辨率荧光成像技术fluor-之间的荧光共振能量转移（FRET）的踏歌escent蛋白已被开发，提供一个定暈的方法在活细胞从受体研究信令9。因为FRET的效率的极端敏感性Z间的距离FRET供体和受体荧光蛋白，FRET成像有被证明是用于研究蛋白质■蛋白质的宝贵工具相互作用系统蒸发散

5、10,11以及在蛋白质复合物的构象变化12-14<>在这里，我们报告的使用FRET研究加之结果定量显微镜來形容BCR信号■最早的事件ING在经过抗原结合活细胞在第几秒钟。该结果表明BCR的意外动态响应帧内作为信令发起蜂窝结构域抗原结合。（一）流量野生型仪J558L细胞（0）或稳定表达J558L细胞免疫球蛋白A,M或G共转染的构建编码野生型或CFP（°C）-或YFP（Y）-标记BCR组件；细胞刺激用牛血清白蛋白1分钟，固定和透化，并用单克隆抗体特异性染色为磷酸。结果呈现作为平均荧光强度（MFI）在磷酸化酪氨酸染色的BCR基因转染细胞。所有的细胞有细胞类似的表达通过流式细胞仪检测表面B

6、CR,用Cy5缀合的抗体来染色免疫球蛋白。数据代表平均值土标准差三个实验。（B）的共聚焦显微术J558L细胞只表达间YFP和IG・B或只免疫球蛋白一个・YFP和IG-B,示出了内YFP荧光（左一）;J558L细胞表达M-YFP,免疫球蛋白A和免疫球蛋白・B复合物或M,IG•—个・YFP和IG-B配合物，表现出细胞表面YFP荧光（中间，顶部或底部，分别）；或表达M-YFPJ558L细胞，IG・a和IG・B复合物或间，IG•—个・YFP和与IgM待异性Cy3标记染色的Ig-B复合物标记的抗体，并显示Cy3的荧光（右，顶部或底部，分别）。原版的放大倍率，A63o（C,D）的单个细胞的表达

7、任一间YFP球蛋白・a和lg的-B复合物的YFP和Cy3的表而的荧光强度（实心圆）或间，免疫球蛋白一个-YFP球蛋白・B复合物（空心圆），用Cy3标记的IgM特异性抗体（c）或Cy3标记的lg-b特异性抗体染色（四）。虚线表示对于m各种化学计量预测YFP/Cy3的比率：免疫球蛋白A（在线路的端部）。该预测是由一个线性衍生适合从表达间YFP球蛋白和免疫球蛋白B（C）和m,免疫球蛋白一个-YFP和IG-B（D）单元中的数据；实线被设置为1：1。在B-D数据代表三独立的实验