【精品】生防菌定量分析方法

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1、一蜡质芽也杆菌3.蜡质芽抱杆菌定量分析3.1试剂与溶液（1）无菌水、蒸憾水；（2）培养基：选择性培养基的制备按Watterson.J・R方法（有所改动）,配方如下（g/L）K2IIP041.0,MgS04•711200.2,FeS04•7H200.01,CaC120.01,NII4C11.0柠檬酸钠5.0,酵母膏0.1,geacose1.0,PH7.2固体用500ml三角瓶分装200ml,加琼脂2.4gl21°C维持15min,灭菌后备用。3.2.仪器显微镜、天平（精确至O.Olg）、量筒、搪瓷缸、电炉、pll计、酒精灯、无菌三角烧瓶和培养皿（90mm）、超净工作台、培养箱（30±1）

2、°C。3.3检验步骤3.3.1.平板培养基的制备：待融化后的培养基冷却至45°C左右后，在超净工作台中迅速将此培养基倒于无菌培养皿内，待凝固后备用。3.3.2.在超净工作台中称取试样10.0g（精确至0.01g）放入装有90mL无菌水的灭菌三角烧瓶中（瓶内预先加有玻璃珠20个左右），在30°C的旋转式摇床上以150r/min充分振荡0.5h,即得1：10的菌悬液母液。3.3.3用无菌移液管吸取上述1：10的稀释液5ml于45inl无菌水中，充分振荡，混合均匀，得到1：102的稀释液。另取一支灭菌移液管，按上述顺序操作，直到比所需最高稀释度低一个数量级为止。则分别得到一系列稀释度的稀释液

3、（每个稀释度必须更换无菌移液管）o3.3.4.取107、5X107、108稀释度，分别用移液器吸取0.lmL稀释液于平板培养基上，并用无菌玻璃刮刀在琼脂表面均匀涂布，每个稀释度5个重复。将涂抹均匀的平板培养基置于28°C的培养箱中培养24h〜36h后进行计数。3.3.5.结果计算以平板上出现30个〜300个菌落数的稀释度平板为计数标准。当只有一个稀释度的平均菌落数在30个〜300个之间时，则以该平均菌落数为计数标准。若有两个稀释度，其平均菌落数均在30个〜300个Z间，应按两者菌落总数之比值来决定。如其比值小于2应计数两者的平均值，若大于2则以其中稀释较小的为计数标准。若四个稀释度的平

4、均菌落数均大于300个，则应以稀释度最高的平均菌落数为计数标准。若四个稀释度的平均菌落数均小于30个，则应以稀释度最低的平均菌落数为计数标准。若四个稀释度的平均菌落数均不在30个〜300个之间，则以最接近300个或30个的平均菌落数为计数标准。根据下式计算试样中蜡质芽抱杆菌总数：蜡质芽抱杆菌活菌总数(cfu/g)=菌落平均数X总稀释倍数X10(1)3.4杂菌率计算按GB/T4789.2-2003中的菌落总数测定方法进行。根据菌落特征判定，并按下式计算出试样中杂菌率：杂菌数杂菌率二xlOO蜡芽泡杆菌数+杂菌数二荧光假单胞菌3定量分析3.1试剂与溶液3.11.无菌水、蒸馅水；3.12牛肉膏

5、蛋白腺培养基：蛋白月东牛肉膏3g；NaCI5g;蔗糖5g；琼脂糖15g；PH7；总体积lOOOmLo培养基在121°C下湿热灭菌30mir）o3.2仪器显微镜、天平（精确至O.Olg）.量筒、搪瓷缸、电炉、pH计、酒精灯、无菌三角烧瓶利培养皿（90mm）、超净工作台、培养箱（30±l）°Co3.3检验步骤3.3.1.平板培养基的制备：待融化后的培养基冷却至45°C左右后，在超净工作台中迅速将此培养基倒于无菌培养皿内，待凝固后备用。3.3.2.在超净工作台中称取试样10・0g（精确至O.Olg）放入装有90mL无菌水的灭菌三角烧瓶中（瓶内预先加有玻璃珠20个左右），在30°C的旋转式摇床

6、上以150r/min充分振荡0.5h,即得1：10的菌悬液母液。3.3.3用无菌移液管吸取上述1：10的稀释液5ml于45ml无菌水中，充分振荡，混合均匀，得到1：102的稀释液。另取一支灭菌移液管,按上述顺序操作，直到比所需最高稀释度低一个数量级为止。则分别得到一系列稀释度的稀释液（每个稀释度必须更换无菌移液管）。334•取109、5X10%10】°稀释度，分别用移液器吸取O.lmL稀释液于平板培养基上，并用无菌玻璃刮刀在琼脂表面均匀涂布，每个稀释度5个重复。将涂抹均匀的平板培养基置于28°C的培养箱中培养24h〜36h后进行计数。3.3.5结果计算以平板上出现30个〜300个菌落数

7、的稀释度平板为计数标准。当只有一个稀释度的平均菌落数在30个〜300个之间时，则以该平均菌落数为计数标准。若有两个稀释度，其平均菌落数均在30个〜300个之间，应按两者菌落总数之比值来决定。如英比值小于2应计数两者的平均值，若大于2则以其中稀释较小的为计数标准。若四个稀释度的平均菌落数均大于300个，则应以稀释度最高的平均菌落数为计数标准。若四个稀释度的平均菌落数均小于30个，则应以稀释度最低的平均菌落数为计数标准。若四个稀释度的平均菌落数均不