上海交通大学遗传学上午6组果蝇杂交实验方案

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1、杲蝇杂交实验方案1・实验的目的：1丄验证基因伴性遗传的规律1.2验证基因连锁与交换规律并计算重组值2•实验材料：2.1黑腹果蝇，Drosophilamelanogaster黑腹杲蝇也称黑尾杲蝇(学名：Drosophilamelanogaster),是被人类研究得最彻底的生物之一，为模式生物。其名字源于它喜好腐烂的水果以及发酵的果汁。科学分类：界：动物界AnimaliaH：节肢动物门Arthropoda纲：昆虫纲Insecta亚纲：有翅亚纲Pterygotai：双翅HDiptera科：果蝇科Drosophilidae属：果蝇属Drosophila种：黑腹果蝇D.m

2、elanogaster果蝇性别和突变形状的鉴别:雄性J雌性早黑腹果蝇雌性体长2.5毫米，雄性较之要小。雄性腹部冇黑斑(blackpatch),前肢有性梳(sexcombs),而雌性没有，可以此来作区别。影响部分性状缩写性状特征染色体上座位显隐性遗传眼色W白眼X1.5隐性体色y黄身X隐性翅形m迷你翅X36.1隐性眼B棒状眼X显性翅形dp粗短翅II隐性翅Cy卷翅II显性翅Ser残翅IIR67.0显性刚毛Sp多生背侧刚毛(notopleuralbristles)II显性刚毛Sb刚毛(bristles)粗短III显性/GFP萤光外源显性2.2黑腹果蝇生活史雌蝇可以一次产

3、下5个0.5毫米大小的卵，总共约400个。它们有绒毛膜和一层卵黄膜包被，其发育速度受环境温度影响。果蝇的生活周期长短与温度有密切的关系。一般来说，30°C以上的温度能使果蝇不育或死亡，低温能使生活周期延长，生活力下降，饲养果蝇的最适温度为20~25°C。在25°C坏境下，22小时后幼虫就会破壳而出,并且立刻觅食。因为母体会将它们放在腐烂的水果上或其他发酵的有机物上，所以它们的首要食物来源是使水果腐烂的微生物，如酵母和细菌，其次是含糖的水果。幼虫24小时后就会第一次蜕皮，并但不断生长，以到达第二幼体发育期。经过三个幼虫发育阶段和四天的蛹期，在25°C下过一天，就会

4、发育为成虫。生活周期长短与饲养温度的关系10°C15°C20°C25°C卵f幼虫57天18天8天5天幼虫一►成虫6天4天果蝇在25。C,从卵到成蝇需要十天左右，成虫可活26~33天。果蝇生活史如下图:第一批成虫成虫（第八天）（可活26-33天）▲＞减数分裂＞减数分裂A卵受精*精子一^一*]蛹（第四天）▲第一批卵孵化（第零天）产第一批卵（第一天）果蝇的生活周期和各发育阶段的经过时间2.3黑腹果蝇的饲养方法果蝇以酵母菌为主要食料，凡能发酵的基质都可做为果蝇饲料。实验室里主要用玉米。原种每2・4周换一次培养基，看到幼虫后就将成虫赶去。各品系之间避免杂交2.3研究的性状

5、及显隐性本次研究的是野生型黑腹果蝇：红眼、长翅、直刚毛（++、++、++）突变型黑腹果蝇：门眼、小翅、卷刚毛(ww、mm、snsn)实验技术流程伴性遗传和连锁与交换一、亲本的纯种培养：1、亲代培养2、挑处女蝇3、杲蝇杂交二、杂交亲本即为突变型的处女蝇和野生型的雄果蝇。三、遗传式：伴性遗传：P¥XWXWX$XWYF1^XWXWX3XWYF2¥0.25XwXw:O.25XWXW:0.25XwY：0.25XwY连锁与交换Pwmsn/wmsnX$+++/YCFl早wmsn/+++X£wmsn/YF2待测记录后代齐种表现杲蝇数4.1亲本的纯种培养4.1.1亲本饲养瓶的准备

6、a.饲料配制:水/ml琼脂/g蔗糖/g玉米粉/g酵母粉/g丙酸/ml玉米饲料2001.513171.41(1)根据上表，取应加水量的一半，加入琼脂，煮沸，待充分溶解后加糖煮沸溶解(2)取另一半水混合玉米粉，加热，调成糊状。(3)将上述两者混合，煮沸。(4)待稍冷后加入酵母粉及丙酸，充分调匀分装。b.饲料瓶的准备取中型指管，以纱布包的棉花球做瓶塞。消毒后加入饲料，冷却后用酒精棉花擦拭内壁，插入消毒过的吸水纸作为幼虫化蛹的干燥场所。c.亲代果蝇挑选将两个品系的果蝇麻醉后挑选外观完整健康的野生型果蝇4对，突变型8对，扫入准备好的饲养瓶中培养。(雌雄果蝇的区分：在肉眼看

7、來,雄果蝇的尾部有黑点，较尖.雌果蝇的没有，是白的,较圆显微镜下雄果蝇的第一•对腹肢上有性梳,和梳子长得很像。)4.1.2果蝇的麻醉与转瓶先将长冇果蝇的培养瓶在海绵垫上敲，使Z全部震落在培养瓶底，然后迅速打开培养瓶塞，将果蝇倒入去盖的麻醉瓶中，然后立即塞上棉塞。稍微打开棉塞，并在其上滴加2~3滴乙待呈昏迷状态（附肢收缩，双翅紧贴背部）后将其倒到干净的滤纸上观察。观察过程中如若杲蝇醒來则可滴几滴乙瞇于滤纸上（不可直接滴在杲蝇上）,用麻醉血立即扣住复苏的果蝇，数秒钟后继续观察。观察结束后，用毛笔将果蝇扫入平放的培养瓶中，待其醍来后才可将瓶竖起。4・2杂交1（伴性遗传

8、的观察）4.2.1杂交用