咖啡 咖啡因含量的测定

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1、中华人民共和国国家标准咖啡咖啡因含量的测定高效液相色谱法Coffee—Determinationofcaffeinecontent—Methodusinghigh-performanceliquidchromatography(ISO10095:1992,IDT)GB/T19182—2003/ISO10095：19921范围本标准规定用高效液相色谱测定普通的和脱咖啡因的生咖啡和焙炒咖啡豆，以及普通的和脱咖啡因的咖啡抽提粉中的咖啡因含量的一种方法。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

2、凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ISO1447：1978生咖啡——水分含量的测定(常规法)ISO3726：1983速溶咖啡——在70℃减压条件下减重的测定ISO4072袋装咖啡取样ISO6670衬里箱装速溶咖啡取样ISO6673：1983生咖啡——在105℃下减重的测定3原理将试料放入水中，加热至90℃，在有氧化镁存在的条件下，抽提咖啡因并过滤，

3、然后用苯基改性二氧化硅微柱将全部抽提液纯化。使用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定其咖啡因含量。4试剂除非另有规定，只能使用确认的分析级试剂，以及蒸馏水或脱矿物质水或与之等效纯度的水。4.1甲醇，液相色谱级。4.2氨溶液(0.3mol/L)：甲醇，90∶10体积混合液。4.3洗提溶剂，纯化柱用，甲醇∶水∶乙酸，75∶25∶1体积混合液。4.4流动相，甲醇∶水，30∶70体积混合液。取600mL甲醇(4.1)倒入2L单标容量瓶内，加水至刻度，混合后混合液用孔径为0.45μm过滤器过滤。4.5乙醇∶水，1∶4体积混合

4、液。4.6氧化镁。4.7咖啡因储备液：相当于每升含0.5g咖啡因溶液。称取125mg咖啡因，精确至0.1mg，放入250mL棕色玻璃容量瓶内，并用乙醇∶水(4.5)加至半满，咖啡因溶解后，再加相同的乙醇∶水混合液到刻度。该溶液在冰箱内可保存一个月。4.8咖啡因标准溶液A，相当于每升含0.010g咖啡因，用于脱咖啡因的产品。将储备液(4.7)加温至室温后，用吸移管(5.12)吸取2mL移入100mL单标容量瓶内，用水补充至刻度并摇匀。该溶液于当日配制使用。4.9咖啡因标准溶液B，相当于每升含0.05g咖啡因，用于普

5、通的产品。将储备液(4.7)加热至室温后，用吸移管(5.12)吸取5mL移入50mL单标容量瓶内，并用水补充至刻度并摇匀。5仪器普通实验室仪器，特别是下列各项。5.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器，允许使用的波长在254nm至280nm之间。装有一台带刻度记录纸的记录仪。测定时最好选择接近280nm处，因为咖啡因最大吸收波长是在272nm。5.2高效液相色谱用的色谱柱C18型，最好是微球粒，并至少具有5000个理论塔板数的性能。一条柱的理论塔板数N，可以根据注入纯咖啡因标准溶液，而得到的峰形进行如下计算。式中：t

6、——峰的保留时间；w——半峰宽度。5.3纯化柱，用于反相色层(分离)法。柱的容量3mL，是用于微粒平均大小为40μm苯基改性的二氧化硅填充。注：在反相层析中，用苯基改性的3mLBakerSPE柱是一种可在市场买到的适用产品，这是给使用本国际标准的人员提供方便的信息。而不是国际标准化组织对这产品的认可。5.4咖啡磨，适用于磨碎焙炒的咖啡豆。5.5嵌齿轮磨，装有冷却套；或者分析磨、装有刀片和冷却套；或者其他适于磨碎生咖啡豆的磨。5.6筛，用金属材料织成，其孔径大小为630μm。5.7过滤器，其微孔大小为0.45μm。

7、5.8水浴锅，能在90℃±1℃温度下连续搅拌工作。5.9分析天平，能称量精确至0.0001g。5.10螺旋盖瓶子，容量为250mL试剂瓶。5.11单标容量瓶，容量为10mL、50mL、100mL、250mL和2L。5.12吸移管，容量为2.0mL、5.0mL、10.0mL。6取样袋装咖啡取样按ISO4072执行。衬里箱装速溶咖啡取样按ISO6670执行。7试样的制备若有必要，用5.4或5.5所规定的设备研磨，直至试样能通过(5.6)所述的筛网为止。8操作程序8.1干物质含量的测定测定一部分试样中的水分含量，用于计

8、算干物质的含量，并按下列方法进行。ISO1447或ISO6673，用于生咖啡。ISO3726用于速溶咖啡。对于其他类别的咖啡以及从咖啡衍生的产品，将按未来的国际标准执行。8.2试料8.2.1普通的和脱咖啡因的生咖啡或焙炒咖啡：称取这种试样1g，精确至0.0001g。8.2.2普通的和脱咖啡因的速溶咖啡粉：称取这种试样0.5g，精确至0.0001g。8.3咖啡因的提取8.3