实验四蛋白质的性质实验

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1、实验四蛋白质的性质实验二——等电点测定和沉淀反应一实验目的1、了解蛋白质的两性解离性质。2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。5、了解变性与沉淀的关系。二实验原理---等电点测定蛋白质是两性电解质，即其分子中含有的自由氨基和羧基均可解离，解离示意式如下：二实验原理---等电点测定蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的PH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的---等电点。二实验

2、原理---等电点测定各种蛋白质分子由于所含的碱性氨基酸和酸性氨基酸的数目不同，因而有各自的等电点。凡碱性氨基酸含量较多的蛋白质，等电点就偏碱性，如组蛋白、精蛋白等。反之，凡酸性氨基酸含量较多的蛋白质，等电点就偏酸性，人体体液中许多蛋白质的等电点在pH5.0左右，所以在体液中以负离子形式存在。所带电荷影响因素内因：酸性、碱性氨基酸含量外因：所在溶液环境的PH值二实验原理---等电点测定不同蛋白质各有特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。本实验通过观察不同pH溶液中的

3、溶解度以测定酪蛋白的等电点。配制各种不同pH值的醋酸溶液，向各个溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。二实验原理---沉淀反应蛋白质水溶液是一种比较稳定的亲水胶体溶液，保持稳定的因素有两点：①蛋白质颗粒含有很多极性基团，氨基，羧基，巯基等，亲水后形成水化层，使蛋白颗粒互相隔开，不容易聚集；②非等电点状态时，蛋白颗粒带有相同电荷，互相排斥。因此，蛋白质在水溶液中，虽分子量很大，但仍能维持稳定的溶解状态。在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因脱水和失去电荷而沉淀。二实验原理---沉淀反应蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如

4、电荷），并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。所以，蛋白质的变性与沉淀之间没有必然联系。三实验操作---等电点测定（一）酪蛋白等电点的测定（1）取同样规格的试管4支，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀。三实验操作---等电点测定（2）向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，摇匀。此时1、2、3、4管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。静置10分钟后，观察其混浊度。最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。三实验操作---沉淀反应（二）蛋白质的沉淀及变性二实验原理---沉淀反应【各种沉淀法的比较表】