核盘菌转录因子SsAMS2的功能研究

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1、分类号：Ｓ４３２．１单位代码０１８３：１研究生学号：２０１５８６２０２０密级：公开＿吉林大学硕士学位论文学术学位（）核盘菌转录因子ＳｓＡＭＳ２的功能研究ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＳｓＡＭＳ２ｉｎＳｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ作者姓名：王翘楚专业：植物保护研究方向：植物病原真菌分子生物学指导教师：潘洪玉教授培养单位：植物科学学院２０１８年６月核盘菌转录因子SsAMS2的功能研究Functionalanalys

2、isofthetranscriptionfactorSsAMS2inSclerotiniasclerotiorum作者姓名：王翘楚专业名称：植物保护指导教师：潘洪玉教授学位类别：农学硕士答辩日期：2018年5月28日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学博士或硕士学位论文原创性声明（）本人郑重声明，：所呈交学位论文，是

3、本人在指号教师的指导下独立进行研宄工作所取得的成果，。除文中已经注明引用的内容外本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果＝对本文的研宂做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式！：标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：曰期山丨？年（！月今曰中文摘要核盘菌转录因子SsAMS2的功能研究核盘菌（Sclerotiniasclerotiorum(Lib.)deBary）是一种死体营养型植物病原真菌，可以侵染400多种植物，在世界范围内造成巨大的经济损失。侵染垫是核盘菌重要的侵染结构，

4、在侵入寄主组织中起决定性作用，在与寄主互作过程中，核盘菌能够产生一系列的致病因子，草酸在破坏细胞结构，降低寄主抗性方面具有重要作用，是核盘菌的重要致病因子。在核盘菌中存在9个含有GATA锌指结构域的转录因子。其中，SsNsd1已有研究能够调控菌核、子囊盘、侵染垫的形成与发育，并对核盘菌精孢子的产生有负调控作用。SsAMS2也是一个GATA转录因子，与裂殖酵母中的Ams2具有同源性，推断其在调控组蛋白基因转录起始中起重要作用。本研究克隆得到SsAms2基因的两个靶序列，并连接于RNAi载体pSilent-Dual上，将重组质粒转入核盘菌原生质体后对基因S

5、sAms2进行沉默，得到沉默转化子，发现沉默转化子中SsAms2基因的表达量显著下降。进一步分析沉默转化子与野生型的表型差异，在核盘菌的生长发育方面，沉默转化子的菌丝生长速率变慢，菌核形成总重量降低，菌丝弯曲，分枝显直角，且分枝菌丝生长短小。同时发现沉默转化子的菌丝中细胞核数量减少。通过对组蛋白（H2A，H2B，H3，H4）及组蛋白H3变异体CENP-A编码基因的表达量分析，组蛋白基因均出现下调。对细胞周期调控蛋白Cdc6，Cdc28进行表达量分析，其表达量也出现下调。研究结果暗示SsAMS2能够调控S期组蛋白基因的转录，影响细胞的分裂过程，从而调控核

6、盘菌的生长过程。SsAms2被沉默后，在含过氧化氢平板上生长的核盘菌相对于野生型并未受到抑制，反而有抗性增强的趋势，推测SsAms2对过氧化物酶的产生有负调控作用。在抗高盐渗透胁迫环境下，野生型及沉默转化子的抑制效果无显著差异，证明SsAms2不参与调控高渗透抗性。此外，沉默转化子的侵染垫形成显著减少，草酸的产生量也明显减少。通过离体菜豆叶片接种实验，离体叶片的发病速度显著降低，进一步阐明SsAms2在核盘菌致病性方面具有重要调控作用。I上述有关核盘菌转录因子基因SsAms2的功能研究，进一步加深了对核盘菌生长发育与致病机制的解析问题探索与解析，为菌核

7、病的防治提供新理论与新思路。关键词：核盘菌，转录因子，SsAms2，生长发育，致病性IIAbstractFunctionalanalysisofthetranscriptionfactorSsAMS2inSclerotiniasclerotiorumSclerotiniasclerotiorumisanecrotrophicplantpathogencausingsignificantfinancialloss.Over400plantspeciescanbeinfectedbyS.sclerotiorum.Infectioncushionisthei

8、mportantinfectionstructurewhichplaysadecisivero