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《鱼腥藻藻蓝蛋白提取优化和抑菌研究【文献综述】》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、毕业设计文献综述生物科学鱼腥藻藻蓝蛋白提取优化和抑菌研究[摘要]本实验主要以鱼腥藻为实验材料，对鱼腥藻藻蓝蛋白的提取优化，分离纯化和生理功能进行了概况研究.[关键词]鱼腥藻；藻蓝蛋白；提取优化；分离纯化；生理功能藻蓝蛋白是一种深蓝色粉末，色泽美观。它既是一种蛋白质，又是一种极好的天然食用色素，同时又是良好的保健食品。据科学研究表明，藻蓝蛋白具有刺激红细胞集落生成，类似红细胞生成素的作用；藻蓝蛋白具有补血、调整白血球和提高淋巴细胞活性的作用；增加体能、促进红血球增长，能增进机体免疫功能，促进生长发育；藻蓝蛋白还具有抑制
2、某些癌细胞的作用；具有很高的营养价值和医疗价值。藻蓝蛋白作为天然食用色素，它可以改善食品的色泽，不仅能提高食品的档次，而且能增加食品中的功能成份。藻蓝蛋白是少见的色素蛋白之一。它不仅颜色鲜艳，而且本身是一种营养丰富的蛋白质，其氨基酸组成齐全，必需氨基酸含量高。藻蓝蛋白是水溶性色素，清亮鲜艳，外观悦目可爱，可作为食品、化妆品的添加剂。目前藻蓝蛋白的产品绝大部分来自螺旋藻，但由于螺旋藻需在碱性环境(pH11)下生产，在培养过程中需添加大量NaHCO3，不仅增加成本，同时产品中残留的NaHCO3不易去除干净。不适合作食品添
3、加剂及药物等使用。同时，生产中螺旋藻藻体要清洗三遍才能用于提取，因此培养基和清洗液的排放也会对环境造成污染。鱼腥藻(Anabeana)属淡水藻，培养过程中操作简单易控制，生长速度快、产量高、成本低、适应性强，一年四季均可生产，其中藻蓝蛋白含量高于螺旋藻，同时鱼腥藻还具有固氮能力，产生的有机氮作为饲料蛋白。因此，利用鱼腥藻提取藻蓝蛋白，不仅可以避免采用螺旋藻提取藻蓝蛋白的高成本，高污染的弊端，也可大大降低成本，是一种价廉易得的藻蓝蛋白资源。1藻蓝蛋白的提取方法1.1反复冷冻提取法藻蓝蛋白是一类水溶性光合色素蛋白复合物，
4、可用低离子强度的中性磷酸盐缓冲液提取，制备藻蓝蛋白的粗提物,将鱼腥藻的培养液在3000r/min离心10min取沉淀,取同体积的磷酸缓冲液(pH7.0)混匀,置于冰箱内反复冻融5次,再加入适当的磷酸缓冲液在混匀器上混匀4℃下4000r/min104min,收集蓝色上清液,将所得上清液用55%饱和度的硫酸铵溶液盐析一个小时左右，待硫酸铵于早蓝蛋白完全混合后4℃下5000r/min离心l0min,将沉淀收集起，既为藻蓝蛋白初提液。在紫外分光光度议上分别测在280nm和620nm时的吸光度，来计算初提液中藻蓝蛋白的含量。1
5、.2PBS缓冲液直接提取法配制pH=6.0的PBS缓冲溶液。称取20g鱼腥藻粉,加入配制的缓冲溶液200mL,然后将其放在磁力搅拌器上搅拌4h,将搅拌后的溶液置于离心机中10000g离心10min,收集蓝色上清液。将离心得到的上清液加洗涤剂洗涤,再将洗涤后溶液进行过滤。将滤液用旋转真空蒸发仪蒸干,可得蓝色固体,将固体置于干燥器中1h,待完全干燥后取出,将其研磨成蓝色粉末样品。即为藻蓝蛋白初提物。1.3十二烷基苯磺酸钠处理结合柱层析分离法称取60g-100g藻粉,加人0.03mmol/L的十二烷基苯磺酸钠600mL-1
6、000mL,40℃恒温,置于磁力搅拌器上搅拌12h,然后进行抽滤,收集滤液并用50%饱和度的硫酸铵溶液进行盐析,4℃下10000g离心10min,沉淀用0.1mol/LPBS缓冲液(pH=7.0)渗析12h。最后所得蛋白质置于硅藻土545柱中,分别用0.01mol/L、0.02mol/L、0.05mol/L、0.065mol/L的硫酸铵溶液(pH7.0)分级洗脱,将各浓度洗脱液分别收集起来,并将藻蓝蛋白洗脱液合并起来,反复冰冻浓缩。所得藻蓝蛋白洗脱液用70%饱和度的硫酸铵溶液盐析,4℃下10000g离心10min,沉
7、淀用前面所用PBS缓冲液透析过夜,然后分别上两根DEAE—纤维柱,用0.1mol/L含0.1mol/LNaCl的PBS缓冲液(pH=7.0)洗脱藻蓝蛋白。洗脱液用80%饱和度的硫酸铵盐析,离心,沉淀用PBS缓冲液透析12h,离心所得固体为杂蛋白,而上清液即为纯化后藻蓝蛋白,反复冰冻浓缩后得干粉,置于-20℃保存。1.4氯化钾溶菌酶或冻融提取法提取藻蓝蛋白酶法,用蒸馏水稀释藻粉或藻泥,再以KCl和溶菌酶联合处理,30℃温育以破碎胞壁,负压抽滤,得粗提液,用醋酸缓冲液调pH至3.5～4.0,置冰箱中沉淀,8000r/mi
8、n离心10min,留上清液,蒸发干燥得藻蓝蛋白干粉;冻融盐析法,藻粉或藻泥用蒸馏水洗,-30℃急冻,取出置37℃水浴急融,反复3～5次,8000r/min离心10min得上清液,再加50%饱和度硫酸铵沉淀,用PBS透析至平衡,蒸发干燥得藻蓝蛋白干粉;冻融过柱法,冻融、沉淀得到的藻蓝蛋白糊,经凝胶柱层析分离,真空干燥得藻蓝蛋白干粉。2藻蓝蛋白的分
