本科毕业论文-HPLC法测定拨云退翳丸中甘草酸的含量

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1、HPLC法测定拨云退翳丸中甘草酸的含量天津中医药大学一、研究背景二、实验研究主要技术路线三、实验内容四、讨　论五、结　语拨云退翳丸是《中国药典》2005年收载的传统成方制剂，密蒙花、薄荷、黄连、甘草等17味中药组成的传统蜜丸。由于该成药药味较多，成分极为复杂，近年来，国内外对其质量控制的报道较少。仅有对该成药中黄连的有效成分盐酸小檗碱进行了含量测定；有对该成药中密蒙花、黄连川芎、地骨皮等一部分药味进行了定性鉴别，但尚未见拨云退翳丸中其它药味鉴别方法的报道。研究背景目前，中成药国际国际市场销售额每年约160

2、亿美元而中国只占5%，原因是中成药走向国际市场的瓶颈是质量标准。自2002年12月起我国实行新的《药品注册管理办法》，其中规定，药品生产企业可以申请高于国家法定标准的药品标准作为自有产品的注册标准，提高产品质量提升品牌，从而提高市场竞争力。因此，基于上述情况，本课题的立项旨在建立并完善拨云退翳丸的质量控制标准。主要技术路线拨云退翳丸查看药典、检索文献正交试验法HPLC法测定甘草酸含量实验内容拨云退翳丸密蒙花80g蒺藜(盐)60g菊花20g木贼80g蛇蜕12g蝉蜕20g荆芥穗40g蔓荆子80g薄荷20g当归6

3、0g川芎60g黄连20g花椒28g地骨皮40g褚实子20g天花粉24g甘草12g药物的组成一、仪器与试药二、方法与结果三、讨论1、仪器：SHIMADZULC-10AD液相色谱仪(SPD-10AUV检测器,N－2000双通道色谱工作站)。2、试药：甘草酸铵对照品,由中国药品生物制品检定所提供（批号：110731—200306)。甲醇为色谱纯；乙腈为色谱纯；水为新制蒸馏水；其他试剂为分析纯。拨云退翳丸由天津达仁堂制药厂生产(批号：D542014,D542015,D542019)。仪　器　与　试　药1、色谱条件：

4、色谱柱为THERMOODSC18反相柱(5μm、4.6mm×250mm)；柱温为30℃；流动相为乙腈－水－冰醋酸(36﹕62﹕2)；流速为1.0mL/min；紫外检测波长为254nm；理论塔板数不低于2000；分离度大于1.5。方法与结果2、提取条件选择:(三水平四因素正交试验)对有可能影响甘草酸提取的条件进行了摸索，多次作单因素的实验，又经查文献及其他资料，最终确定其因素。包括：A、提取溶媒：水；50%甲醇；3%氨水：甲醇（1:1）B、提取溶媒剂量：50mL；75mL；100mLC、提取时间：30min；

5、60min；90minD、溶媒pH：9；10；11方法与结果2、提取条件选择:(三水平四因素正交试验)因素水平表本实验是一个三水平四因素的实验，fA=fB=fC=3-1=2,故有f试=fA+fB+fC=2×3=6，所以选择三因素水平表，在三因素水平表中，满足f试≤f表的最小正交表是f表为8的正交表L9(34)。因为没有空白列，所以选择重复性实验。方法与结果2、提取条件选择:(三水平四因素正交试验)序号A溶媒种类B溶媒剂量C提取时间DpH值11111212223133342123522316231273132

6、8321393321正交试验表L9(34)方法与结果正交试验结果直观分析表试验号试验结果合计yi1yi2yi3yi1甘草酸含量0.1710.1720.1730.51520.1830.1860.1880.55730.1880.1440.1560.48840.1590.1500.1590.46850.1510.1440.1500.44560.1470.1580.1560.46170.1350.1630.1600.45880.1510.1490.1500.45090.0830.0870.0850.255方法与结果

7、正交试验结果直观分析表方法与结果方差分析表“*”为极显著影响P<0.01正交试验的结论：因素ABCD对试验结果都有极显著影响(P<0.01),故最佳试验方案A1B2C1D2，即样品用3％氨水:甲醇(1:1)；75mL；超声提取30min；溶媒pH为10方法与结果3、对照品溶液制备：精密称取对照品甘草酸铵0.0043g，置50mL容量瓶中，加入适量甲醇，超声5min，取出放冷，用甲醇定容至50mL，摇匀备用，浓度为0.0825mg/mL。4、样品溶液的制备:精密称取3g，置于容量瓶中，加入3％氨水:甲醇(1:

8、1)75mL，称重，超声提取30min，取出放冷，用此溶媒定量补足质量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得样品溶液方法与结果5、阴性对照溶液的制备：按处方组成，将除去甘草的其余药味，按制备工艺要求，制成不含甘草的蜜丸，按供试品溶液项下的方法，制成甘草的阴性对照液。6、干扰试验：按照上述色谱条件，分别取阴性对照品溶液、对照品溶液、样品溶液，注入色谱仪，记录色谱图（见图），从图中可见空白试验无干扰。方法与结果HP