补体和细胞因子的检测

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1、补体的检测一、补体概述二、单个补体成分的测定三、补体总活性测定四、补体结合试验五、补体测定的应用一、概述补体（complement,C）：由30余种广泛存在于血清、组织液和细胞膜表面蛋白质组成的、具有精密调控机制的蛋白质反应系统，其活化过程表现为一系列丝氨酸蛋白酶的级联酶解反应。在机体的免疫系统中担负着抗感染和免疫调节作用,并参与免疫病理反应。补体是天然免疫（Innateimmunity）的重要组成部分。补体系统的组成补体的固有成分经典途径:C1q、C1r、C1s、C4、C2；MBL途径：MBL、丝氨酸蛋白酶、C4,C2;旁路途径:B因子、

2、D因子；三条途径的共同末端通路:C3、C5-C9。调节蛋白：备解素（P因子）、C1抑制物、I因子、H因子、C4结合蛋白等；促衰变因子（DAF）、膜辅助蛋白（MCP）、同种限制因子（HRF）。补体受体：CR1-CR5、C3aR、C2aR、C4aR等。由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产生均为多糖蛋白，大多数电泳迁移率属α、γ球蛋白含量约占血清球蛋白总量的10%，其中C3含量最高、D因子含量最低固有成份间的分子量差异较大，其中C1q最大、D因子最小。对热不稳定，56°C、30min即被灭活，0～10°C条件下活性只能保持3～4d。通

3、常保存要-20°C。种属间含量有差异。豚鼠含量较高。多种理化因素如射线、机械振荡、酒精、胆汁和某些添加剂等均可破坏补体补体系统的理化性质激活途径经典激活途径（classicalpathway）MBL（mannan-bindinglectin）途径旁路途径（alternativepathway）补体活化的共同末端效应（膜攻击阶段）补体系统各成分通常以非活性状态存在于血浆中，在活化物作用下，补体发生复杂的级联反应，表现出生物学活性补体的生物学功能补体系统的功能可分为两大方面：补体在细胞表面激活并形成MAC，介导溶细胞效应；补体激活过程中产生不同

4、的蛋白水解片段，从而介导各种生物学效应。C5678(9)n细胞毒作用，溶菌、杀菌C3b,C4b调理吞噬和免疫粘附作用免疫黏附炎症介质作用常作为单个补体成分的检测指标：C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物等测定方法：免疫溶血法（检测单个补体成分的活性）免疫化学法（检测单个补体成分的含量）二、单个补体成分的测定补体成分分子量(kD)电泳区带血清含量参考值（μg/ml）补体成分分子量电泳区带血清含量参考值（μg/ml）C1q390γ270C979α240C1r95β35B95β210~240C1s85α35D25α2C2117β120~30

5、P220γ225C3190β11300C1INH150α180C4180β2430~600C4bp1100250C5190β275I因子93β50C6128β260H因子159β400~480C7120β255S因子88α500C8163γ1200血清C3测定无论经典途径还是旁路途径C3都参与，可反映出补体的活化情况。１、C3增高各种急性炎症、传染病早期、某些恶性肿瘤（以肝癌最明显）及排异反应等。２、C3降低肾炎的病因鉴别：链球菌感染肾炎血清C3减少，病毒性肾炎血清C3含量正常。免疫性疾病进展期：SLE，膜增殖性肾炎等。补体受体：存在于多种

6、细胞清除免疫复合物、净化机体内环境检测补体受体，有助于判断机体抗感染能力和计数相应的细胞数量目前已知的补体受体归为以下五类：CR1（CD35）CR2（CD21）CR3（CD11b/CD18）CR4(gp150/95，CD11c/18)C3aR/C5aR名称别名CD分类配体细胞分布CR1C3b受体，C4B/C3b受体CD35iC3b、C3b，C4b、iC4b，C3c红细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、B细胞、树突状细胞、肾小球上皮细胞CR2C3d受体，EB病毒受体CD21iC3b、C3dg、C3d、EB病毒、IFN-αB细胞、树突状细胞C

7、R3iC3b受体、Mac-1抗原CD11b/CD18iC3b、植物凝集素、某些细胞多糖中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、NK细胞CR4gp150/95CD11C/CD18iC3b、C3d、C3dg中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板C5aR/C3aRCD88C5a/C3a(活化G蛋白)内皮细胞、肥大细胞、吞噬细胞定义:是根据补体参与抗体介导溶细胞作用的级联效应特征建立的单一补体成分检测法指示系统:以SRBC（sheepredbloodcell,SRBC）-抗SRBC为激活物和指示系统参照体系:以人为设计的缺乏某种补体成分的血清为

8、参照结果判读:若有溶血发生，表明待检标本存在参照血清所缺乏的补体成分，且溶血程度与此补体成分的量呈正比，以50％溶血为终点（一）免疫溶血法参照血清常称之“R（remove）”试剂