基因工程药物的研究现状——乙肝疫苗ppt课件

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1、基因工程药物的研究现状——乙肝疫苗引言：1953年Waston和Crick发现遗传物质DNA的双螺旋结构，给整个生物学乃至整个人类社会带来了一场革命。此后，一系列有关遗传信息即基因研究的成果很快的向应用和开发拓展。1972年，美国斯坦福大学P.Berg博士研究小组使用EcorRⅠ,第一次在体外获得了包括SV40DNA和λ噬菌体DNA的重组DNA分子。1973年，S.Cohen等将两中分别编码卡那霉素和四环素的抗性基因相连，构建出重组的DNA分子，然后转化大肠杆菌，获得了既抗卡那霉素又抗四环素的转化子菌落，这是第一次成功的基因克隆实验，标志着基因工程

2、的诞生。1977年Boyer首次获得生长激素抑制因子的克隆，1982年第一个基因工程重组产品——人胰岛素被批准应用，进入市场。迄今为止，已有50多种基因工程药物上市，近千种处于研发状态。基因工程药物已经形成一个巨大的高新技术产业，产生了不可估量的社会效益和经济效益，由于基因药物的出现，可以大大改善人类的生命质量，乙型肝炎病毒（hepatitisBvirusHBV），其表面由HBsAg(乙肝表面抗原)构成。在HBV携带者血液中存在大量的HBsAg。目前，HBV不能再离体组织或细胞内复制，无法用传统方法制造疫苗。但经研究证实HBV携带者血液中HBsAg

3、提纯，去除HBV和其他杂质所制成的亚单位血源乙型肝炎疫苗可有效预防HBV的感染。乙肝疫苗的主要有效成分为HBsAg均吸附于佐剂【多为Al（OH）3】上。一、简介乙肝五项检测表面抗原（HBsAg）体内是否存在乙肝病毒表面抗体（抗-HBs）是否有保护性e抗原（HBeAg）病毒是否复制既具有传染性e抗体（抗-HBe）病毒复制是否受到抑制核心抗体（抗-HBc）是否感染过乙肝病毒二、临床上应用的乙肝疫苗的种类重组痘苗乙型肝炎疫苗重组CHO细胞乙型肝炎疫苗重组酿酒酵母乙型肝炎疫苗血液乙型肝炎疫苗基因工程疫苗三、什么是重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞）采用基因工程

4、技术将无传染性的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的S基因片段克隆到载体，用重组载体转染真核生物CHO细胞通过细胞培养、增殖、分泌出HBsAg到培养液中，收集分泌液，经高速离心、纯化、除菌后，加入佐剂吸附（氢氧化铝）而制成。CHO？CHO——(Chinesehamsterovary)【中国仓鼠卵母细胞】，该细胞具有不死性，可以传百代以上。全世界应用于人类疾病治疗或预防的基因工程产品大部分是由CHO细胞和大肠杆菌生产的。另外CHO细胞属于成纤维细胞，是一种非分泌性细胞，本身很少分泌CHO内源蛋白，因此对目标蛋白分离纯化工作十分有利。四、重组CHO细胞乙型

5、肝炎疫苗的生产工艺五、重组CHO细胞乙肝疫苗的优缺点优点：CHO细胞表达的重组HepB是高等真核细胞表达产物，其天然结构较低等的真核细胞酵母表达的HBsAg蛋白更适合人体吸收，生产工程中不同于酵母使用硫氰酸盐处理，安全性好。缺点：产生一些副作用，例如红肿、疼痛、发痒、手臂酸重等症状，或者是产生低热、乏力、恶心、食欲不振等与一般疫苗相似的轻微反应。五、疫苗使用方法一般易感者使用10µg/支，每次注射一支，1个月及6个月时注射第2、3支。全程注射3次。新生儿使用20µg/支，第一针在出生后24小时内注射，其余两针同上。高危人群，可用20µg/支。注射

6、部位为上臂三角肌肌内。不宜接种乙肝疫苗的人群有血清病、支气管哮喘、过敏性荨麻疹及对青霉素、磺胺等一些药物过敏者禁用。低体重、早产、剖腹产等非正常出生的新生儿，暂时不宜接种乙肝疫苗。虽然乙肝疫苗对这部分新生儿并无害处，但因其自身的体质状况易发生偶合事件，因此最好推迟接种时间。六、现有疫苗的发展史及存在的问题现有疫苗存在的问题什么是成纤维细胞？定义：普遍存在于结缔组织中的一种中胚层来源的细胞。分泌前胶原、纤连蛋白和胶原酶等细胞外基质成分，伤口愈合过程中可迁移到伤口进行增殖。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，细胞呈梭形或扁的星状，具有突起。根据不同

7、的功能活动状态，将细胞分为成纤维细胞和纤维细胞二型：成纤维细胞乃是功能活动旺盛的细胞，细胞和细胞核较大，轮廓清楚，核仁大而明显，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动；纤维细胞功能活动不活跃，细胞轮廓不明显，核小着色深，核仁不明显，细胞质少。此二型细胞可互相转化。作用原理:成纤维细胞摄取所需的氨基酸，如脯氨酸和赖氨酸等，在粗面内质网的核蛋白体上合成前α多肽链（proalphapolypeptidechain），多肽链输送到高尔基复合体后，组成前胶原分子。前胶原分子由分泌囊泡带到细胞表面，然后通过胞吐作用释放到细胞外。在前胶原肽酶催化下，将每一

8、前α多肽链的尾段除去，成为原胶原分子。许多原胶原分子成行平行排列，结合成具有周期性横纹的胶原原纤维。由胶原原纤维互相结合形