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1、XX大学毕业论文尿脱落细胞TenascincmRNA检测在膀胱癌诊断中的价值2014年6月25日尿脱落细胞TenascincmRNA检测在膀胱癌诊断中的价值【关键词】膀胱肿瘤；尿脱落细胞；Tenascinc；逆转录聚合酶链反应(RTPCR)Tenascinc(TNC)是由单基因编码的细胞外基质糖蛋口分子，主要来源于间质细胞，一些上皮细胞屮也能合成，在胚胎时期各种组织屮均冇广泛的表达,在成熟组织中没有或仅有少量的表达，在多种肿瘤组织中都有突出的表达［1］。我们通过检测膀胱肿瘤患者风脱落细胞中TNC的表达情况來揭示其在膀胱肿瘤诊断屮的价值。1资料与方法1.1临床资料收集膀胱癌患者(
2、均经病理活检确诊)尿液32例，男26例,女6例，年龄30-79岁，按TNM分期标准Ta1例，T114例，＞T211例，按WHO分级标准，G112例，G29例，G35例；前列腺增生症22例，年龄56・76岁，其屮合并膀胱炎患者16例(诊断标准为尿液分析捉示白细胞5个/HP)；健康志愿者5例。1.2试剂总RNA提取试剂盒和DNAMarker购自上海华舜生物工程有限公司,5u/
3、iL的Taq聚合酶和dNTP混合物(各10mmol/L)购于大连宝生物工程公司，TNC引物由上海博亚生物技术冇限公司合成，引物设计参照文献［2］,P1:5TCCTGCTGACTGTCACAATC3',P2:5
4、TGCTCACATACACATTTGCC3。1.3尿液的收取和标本的制备无菌操作留取每位实验者清晨尿150mL,其屮100mL立即离心(4000i7min)沉淀，PBS液洗涤2次再离心后，・70°C冰箱保存，余下50mL作尿细胞学检查。1.4尿脱落细胞TNCmRNA检测使用逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RTPCR)检测尿脱落细胞TNCmRNA。各步反应按试剂盒说明进行，随后将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，电泳结束后在GelDOC1000紫外检测系统屮观察结果并储存图像后进行灰度值测定。1.5尿脱落细胞学
5、检查将收集的另外50mL尿液标本经过离心沉淀后取沉淀物涂片，及吋用100mL/L乙醇固定后釆用苏木素一伊红(HematoxylinandEosin,HE)染色法，以发现肿瘤细胞为阳性，其余为阴性。1.6统计学方法应用SPSS10.0软件进行分析。2结果2.1TNCmRNA检测结果32例膀胱癌患者屮冇26例尿脱落细胞屮约在250bp附近检测出TNC基因条带(242bp),阳性率81.3%,合并膀胱炎的16例前列腺增生症患者中有11例尿脱落细胞中检测到TNC基因表达，特异性为59.3%,健康志愿者未检出该基因的表达(图1)。图1尿脱落细胞的TNC扩增产物琼脂糖凝胶电泳图M：DNAM
6、arker；1：分化I级膀胱癌患者；2、8：合并膀胱炎的前列腺增生症患者；3、4、9：分化II级膀胱癌患者；5：为分化III级膀胱癌患者；6：为浸润性膀胱癌患者；7：为浅表性膀胱癌患者；10：健康志愿者2.2灰度值TNC阳性膀胱炎患者TNC平均灰度值低于分化I级膀胱癌患者，但差别无统计学意义(P0.05),膀胱癌患者TNC平均灰度值随膀胱癌的分级的增高而升高，各级之间TNC平均灰度值存在统计学差异(P0.05,表1)。浅表性膀胱癌与浸润性膀胱癌患者TNC灰度值之间存在统计学差界(P0.05,表2)。2.3尿脱落细胞学检查结果32例膀胱癌患者屮，12例尿脱落细胞学检查阳性(37.
7、5%),正常人和良性病变患者检查结果均为阴性，特异性为100%。表1膀胱炎、分化I、II、III级膀胱癌患者TNC平均灰度值表226例TNC基因阳性浅表性膀胱癌与浸润性膀胱癌患者TNC灰度值中位数3讨论目前临床上诊断膀胱癌的主要手段仍然依赖丁•膀胱镜下取材活检和尿脱落细胞学检杳，膀胱镜和活检是诊断膀胱癌的金标准，但其为有创检查，用于筛查膀胱癌患者受到很人的限制，乐脱落细胞学检查特异性高，文献报道总特异性为94%-100%,但其敏感性低，一般来说低于50%,特别对于早期低级别患者仅为30%,本研究中只有37.5%,口易受主观因素的影响，这就限制了它单独应用丁•膀胱癌的诊断。由丁•
8、尿路上皮肿瘤的凋广、坏死和脱落可使英部分细胞成分直接释放入尿液中，故寻找床液中潜在的瘤标已成为床路上皮肿瘤无创性诊断的一种趋势［3］。TNC是由单基因编码的细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)糖蛋口分子，其编码基因位于9号染色体q32・34上，具冇复杂的分子结构，在动物胚胎发育过程中多种组织中表达，在成熟组织中没有或仅有少量的表达，TNC的功能强大而复杂，参与胚胎多种组织的发育及神经的损伤再生、组织的创伤修复、肿瘤发生等过程。研究表明，TNC在乳腺癌，膀胱癌等多种肿瘤
