茚三酮鉴定氨基酸概述

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1、茹三酮鉴定氨基酸概述仁苗三酮简介前三酮（Ninhydrine），又称水合前三酮，水合前满三酮,为白色或浅黄色结晶性粉末。苗三酮是一种用于检测氨或者一级胺和二级胺的试剂。当与这些游离胺反应时，能够产生深蓝色或者紫色的物质，叫做OHOHRuhemann紫。苗三酮常用来检测指纹,这是由于指纹表面所蜕落的蛋白质和肽中含有的赖氨酸残基，其上的一级胺被前三酮检测。在室温条件下，它是一种白色的固体物质，溶于乙醇和丙酮。前三酮可以看作是是二氢苗-1,2,3-三酮的水合物。1901年，苗三酮被成功研制出来以后主耍用于生物医学领域，1954年，瑞典科学家Oden和Hofsten

2、将其应用于潜在汗液手印的显现。前三酮与汗液中的氨基酸、多肽、蛋白质等发生反应，生成蓝紫色的手印纹线。苗三酮也可以用于蛋白质的氨基酸分析。除去脯氨酸之外的大多数氨基酸,水解之后可与苗三酮反应。水解中某些氨基酸的侧链也会被降解。因此对于那些与苗三酮不反应或者发牛其他反应的氨基酸需要另作分析。其余的氨基酸经过色谱分离后可以比色定量。在分析化学反应的薄层色谱（TLC）中，它可以用于检测所有的胺类，氨基甲酸酯类，在经过充分热处理后可以检测酰胺类物质。2.实际运用2.1指纹鉴别汗液手印屮的汗液成分绝大多数是水（约99%以上），其余是少量的无机物和有机物，有机物中包括了人

3、体所含有的各种氨基酸。苗三酮与手印汗液中的氨基酸发生显色反应而现岀手卬。当苗三酮与氨基酸反应时可以释放C02o二氧化碳中的碳原了来源于氨基酸的竣基碳。在考古研究中，这个反应用于释放古老骨骼中竣基碳用于稳定同位素分析，以帮助重现古代生物的食物结构。用一种标记底物处理的土壤，随后利用苗三酮与氨基酸的反应释放竣基胺，可以证明这种底物是否被吸收进微生物蛋白质。这种方法成功的发现了一些氨氧化细菌（也叫做硝化细菌）利用土壤中的尿素作为碳源。法医常用前三酮溶液分析诸如纸张等多孔表面上的潜指纹。手指所分泌的细微汗液聚集于独特的手指纹路表面，也即含有氨基酸的指纹，经过苗三酮处

4、理可以将氨基酸指尖纹路变为可见的紫色。2.2测定茶叶中游离氨基酸总量茶叶中游离氨基酸含量是用来描述茶叶鲜爽程度的一个重要品质指标，还是人体所必需的营养物质，同吋又对人体疾病的康复和预防起着极重要的保健作用。测定茶叶中的游离氨基酸的含量对茶叶的开发利用具有一定指导意义。以茶氨酸为标准品，采用分光光度计为测定仪器，探索一种适丁-茶叶游离氨基酸含量的分析方法。采用比色法测定茶叶中游离氨基酸总量，测定原理为:氨基酸与水合苗三酮共同加热被氧化分解产生co?、氨和比氨基酸少一个碳原子的醛,此时前三酮被还原。在弱酸性溶液中，还原卸三酮与氨及另一分子卸三酮缩合成蓝紫色化合物

5、苗二酮胺⑴YDA)DYDA在570nm处有最大吸收。采用苗三酮比色法测定茶汤中的游离氨基酸总量，采用沸水萃取，最佳的试验条件为:pH8.0，沸水浴加热15min,冷却lOmin后在最大吸收波长570nni处测定。方法的变异系数小于1.69%,加标平均冋收率为96.33%。本法具有操作简单，稳定性重现性较好等优点。2.3定性定量检测丝氨酸随着人们对丝氨酸牛理作用的深入认识和医药保健事业的不断发展，医药、食品、饲料等行业对丝氨酸的需求量正迅速扩人.虽然L—丝氨酸属于非必需氨基酸，但它却具有许多重要的生理功能及用途，在医药、食品、化妆品中均有较为广泛的应用.因此，

6、测定混合氨基酸中丝氨酸的含量对丝氨酸的开发利用具有重要意义.a—氨基酸与苗三酮在弱酸性溶液中共热，反应后经失水脱竣生成氨基苗三酮，再与水合苗三酮反应牛成紫红色或蓝色物质，如图1.脯氨酸等仲胺氨基酸与前三酮反应生成黄色物质.丝氨酸和苗三酮在弱酸性条件下共热可以生成紫红色的缩合物质，且其颜色随着丝氨酸的含量变化而有所不同.十RCH()-

7、-C(b图1a—氨基酸与苗三酮的显色反应上述反应生成的紫红色缩合物颜色的深浅还与反应的PII、显色剂的用量、反应的温度及时间有关。首先，将苗三酮加入到展层剂中，再对氨基酸混合液进行层析.在一定条件下将层析后的前三酮与氨基酸进行显

8、色反应，根据不同颜色即可鉴别丝氨酸.然后，对不同剂量的丝氨酸标准液使用上述方法绘制丝氨酸标准液的吸光度一含量的标准曲线，用以计算氨基酸水解液丝氨酸的含量.结果表明：讳三酮法定性定量检测丝氨酸的最佳实验条件为溶液pII在4.5左右，显色剂用量为每1OmL展层剂中加入2.5mL0.1%前三酮，并在105€下加热5min.3•总结氨基酸的鉴定对于人们日常牛产牛活十分重要。苗三酮鉴定氨基酸，反应灵敏，是鉴定氨基酸的最简便方法。其显色快，现象明显，已经广泛运用于刑侦、农林、化学、金屈等各个行业。4.参考文献[1]张振华.a—氨基酸与苗三酮显色反应影响因素的探讨[J]・

9、邵阳高等专科学校学报，2000,13(1)：42-4