氨基酸分离鉴定中显色剂为什么不能用茚三酮水溶液.doc

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1、氨基酸分离鉴定中显色剂为什么不能用茚三酮水溶液茚三酮根很多种氨基酸都显示紫色没办法分离鉴定呀茚三酮使氨基酸显色原理α氨基酸与茚三酮在弱酸性溶液中共热，反应后经失水脱羧生成氨基茚三酮，再与水合茚三酮反应生成紫红色，最终为蓝色物质。脯氨酸等仲胺氨基酸与茚三酮反应生成黄色物质。该反应可广泛用于各种氨基酸的定性或定量测定。阿尔法氨基酸与水合茚三酮一起加热，经氧化脱氨变成相应的阿尔法酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮被还原成还原成还原型茚三酮。在弱酸性溶液中，氨、还原型茚三酮，和另一分子水合茚三酮反应，缩合成蓝紫色物质。注意事项（1）被分离物质在该溶剂系统中Rf

2、在0.05～0.8之间，各组分之Rf值相差最好能大于0.05，以免斑点重叠。（2）溶剂系统中任一组分与被分离物之间不能起化学反应。（3）被分离物质在溶剂系统中的分配较恒定，不随温度而变化，且易迅速达到平衡，这样所得斑点较圆整。本实验采用八种混合氨基酸为样品，用酸性和碱性两种溶剂进行双向层析，以茚三酮为显色剂，可获得分离清晰的层析图谱，如图3.2所示。 注意事项（1）烘箱加热温度不可过高，且不可有氨的干扰，否则图谱背景会泛红。（2）第一相溶剂最好在使用前再按比例混合，否则会引起酯化，影响层析效果。（3）整个实验操作应戴手套进行。思考题1．酸性与碱性溶剂系统对

3、氨基酸极性基团的解离各有何影响？2．为什么展层时要用两种溶剂系统？性质：又称比移值。是色谱法中表示组分移动位置的一种方法的参数。定义为溶质迁移距离与流动相迁移距离之比。在一定的色谱条件下，特定化合物的Rf值是一个常数，因此有可能根据化合物的Rf值鉴定化合物请问薄层层析时，Rf值在什么范围时，分离效果比较准我帮你查了相关书籍结合我的实验经验，薄层层析采用硅胶G-CMC板，通用展开系统：无水乙醇-苯（1：4）；苯-氯仿（1：3）；丙酮-甲醇（1：1）。先用无水乙醇-苯（1：4）展开，Rf值如果>0.8，改用苯-氯仿（1：3），若Rf值如薄层层析时为甚麼Rf值要

4、在0.2~0.8之间Rf值的大小与样品的结构、性质、溶剂系统等有关薄层层析时Rf值要在0.2~0.8之间主演是考虑的经济性，在效果比较好的情况下保持展开剂的用量少蛋白质的性质实验From：ibioo.Com  Update：2006-12-01【目的和要求】1.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。2.了解蛋白质的两性解离性质。初步学会测定蛋白质等电点的方法。3.加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识，了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。【实验原理】（一）蛋白质及氨基酸的呈色反应蛋白质所含有的某些氨基酸具有特殊结构，可以与某些试剂反应，

5、生成有色物质。1.双缩脲反应尿素被加热至180℃左右时，两分子尿素缩合放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性条件下可与Cu2+结合生成复杂的紫红色化合物。此反应称为双缩脲反应。所有含有两个或两个以上肽键的化合物均有此反应。蛋白质或二肽以上的多肽分子中，含有多个与双缩脲结构相似的肽键，因此也有双缩脲反应，可用此法鉴定蛋白质的存在或测定其含量。2.茚三酮反应蛋白质、多肽和各种氨基酸具有茚三酮反应。除无α-氨基的脯氨酸和羟脯氨酸呈黄色外，其他氨基酸生成紫红色，最终为蓝色化合物。除蛋白质、多肽和各种氨基酸能进行茚三酮反应外，氨、β-丙氨酸和许多一级胺化合物都有此反

6、应。该反应灵敏度达1：1500000（pH5-7）。现已广泛地用于氨基酸定量测定。3.黄色反应凡是含有苯基的化合物都可与浓硝酸反应产生黄色化合物。芳香族氨基酸及含有酪氨酸和色氨酸的蛋白质分子具有此反应。苯丙氨酸很难反应，需加少量浓硫酸才有黄色反应。(二)蛋白质的两性反应及等电点的测定蛋白质和氨基酸一样是两性电解质。调节溶液的酸碱度达到一定的离子浓度时，蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等，以兼性离子状态存在，在电场内该蛋白质分子既不向阴极移动，也不向阳极移动，这时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点(pI)。当溶液的pH值低于蛋白质等电点时，即在H+较多的条件下

7、，蛋白质分子带正电荷成为阳离子，当溶液的pH值大于等电点时，即在OH—较多的条件下，蛋白质分子带负电荷成为阴离子。本实验采用蛋白质在不同pH溶液中形成的混浊度来确定其等电点，在等电点时蛋白质溶解度最小，最容易沉淀析出。 1