生物学分析与测试实验(植物生理学)

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1、实验3植物组织水势的测定(小液流法)植物组织与外界溶液之间发生水分交换由其水势差决定。细内＞d＞w细外时，水分外流，外液稀释，比重变轻，小液流上升。细内v®w外时，组织吸水、外液浓缩、比重变大、小液流下降。细内外时，组织内外水分平衡，外液比重不变。此时，溶液的渗透势等于植物水势，即＜Pw=-iRTC二.材料：马铃薯块茎三、实验仪器药品：10ml刻度试管5支微量进样器1支单面刀片一片砧板1块指管5支打孔器1个试管架1个移液管架1个10ml移液管2支吸耳球1个lmol/L蔗糖溶液甲烯蓝1、配制0・1〜0・5mol/L梯度蔗糖溶液10ml于各刻度试管中。摇匀.编号。2、各

2、取2ml蔗糖溶液于相应编号的指管中。3、用打孔器打取马铃薯条，并在砧板上切成0・5〜1mm厚的小片。■O.蔗糖溶液小液滴上升小液滴下沉•••图3图4小液滴不上升也不下降目图5五、计尊：i

3、/w=-iRTC屮种为细胞水势i为解离系数，蔗糖为1。r为气体常数=0.083XI0取等重马铃薯小圆片于各指管中，浸泡20min,充分摇匀振荡。加少许甲烯蓝于小指管溶液中、摇匀。用微量进样器吸取少量浸泡液，插入相应刻度试管原液正中，轻轻挤出一滴。7、观察小液滴的流动方向，记录小液滴不动的试管的蔗糖浓度，其渗透势即为所测植物组织的水势。L•Pa/(mol•k)。T为绝对温度，单位K,

4、即273+t,t为实验温度。C为等渗溶液的浓度，单位为mol/L则:v

5、/w=-0.083X105X(273+t)X1XC六.分析实验三硝酸还原酶的活性测定硝酸还原酶是植物N素代谢的关键酶，与作物吸收和利用氮肥有关•它作用于NO3■使还原为NO2NRNO3+NADH+H+NO2+NAD++H2Oso.nh7•■NO2-+nh2SO2NH2(磺胺)2HN+=NSO2NH2(重氮化合物)NH2荼胺〉(对一苯破胺一偶氮2—蔡胺)红色二、材料：新鲜冬觅菜。操作步骤:1、2、取新鲜冬觅菜叶片用自来水冲洗干净，用打孔器打取叶圆片2g左右,放入小烧杯中，用蒸馅水冲洗2-3次，吸干

6、表面水分，称取两份0・5g材料分别放入A、B两烧杯中。A杯加蒸馅水5ml,0.1mol/LPBS(PH7.5)5ml；B杯加0.2mol/LKNO3溶液5ml,0.1mol/LPBS(PH7.5)5ml。分别将A、B两烧杯中叶圆片及溶液倒入注射器中，反复减压抽气至叶片下沉，然后倒回各自烧杯中，30°C避光保温0・5h。（或将A.B两烧杯放入干燥器中，将盖子盖严，用真空泵反复减压抽气至叶圆片下沉,然后在30°C避光保温0.5ho）4、分别取A、B烧杯中反应液lml入A、B两试管中，再于每管中加入磺胺试剂2ml,-蔡胺试剂2ml,摇匀，静置0・5h后，于520nm处测定

7、OD值,根据以下公式计算NO*含量，以每小时每克鲜重产生的NO*的Ug数或gmol数表示。酶活性=10XC/(0.5X0.5)(pgNaNO2/h.gFW)附：C(jig/ml)=9.943x(OD值)-0.126五、分析：实验5叶绿体色素的提取、分离和性质—、原理：利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用丙酮，乙醇提取，利用纸层析法可分离不同种类的叶绿体色素，利用叶绿素的提取液可分析其性质。二、材料：新鲜菠菜叶三、操作步骤：1、提取：A、2克菠菜叶片，加少许碳酸钙，石英砂和5ml95%的酒精匀浆一过滤收集滤液一纸层析。B、2g菠菜叶片，加少许碳酸钙石英砂和20ml

8、95%的酒精匀浆f过收集滤液一供分析性质。2、分离（纸层析法，用A液）滤纸色点7-^四氯化炭——图6纸层析简易装炭①准备好层析纸；②点样：用毛细管取叶绿素溶液点于窄条的上方.③层析：在大试管中加四氯化碳3Vml,少许无水硫酸钠，将滤纸窄条端点浸入溶液中（点样处高于液面，滤纸条不得碰到试管壁，盖紧橡皮塞，直立试管于阴凉处。①观察：0・5h后观察色素分布。3、性质：（用B液）①荧光现象：在试管中加少许提取液。分别在反射光和透射光下观察提取液的颜色，在透射光下呈绿色，在反射光下为暗红色，即为荧光现象。②光对叶绿素的破坏作用：取两支同样的试管各加入lml提取液,支放在黑暗中

9、保存l・Oh,—支放在阳光下l・Oh,分别观察它们的颜色变化。+6NHCI加少许醋酸铜③铜代作用：取B提取液2・5ml于试管中1-2滴摇匀，变化观察颜色—aT观察颜色变化。④叶绿素的皂化作用；取B提取液2.5ml于试管中，加l・5ml30%KOH—甲醇溶液，摇匀，静置lOmin,再加2.5ml甲苯，摇匀后静置分层；看到黄色素和绿色素分层。⑤观察色素溶液的吸收光谱：用分光计观察电灯光谱，提取液，光破坏液，铜代液，皂化液上层液（黄），下层液（绿）的吸收光谱。五、分析:实验二叶绿素含量和叶绿体活性测定2叶绿素a和b含量的测定—、原理：叶绿素a和b在红光区的最大吸收峰分