生化提高性实验预习思考题

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1、实验七核算的制备及定量测定（I）动物肝脏DNA的提取1、DNA在浓NaCl（l-2mol/L）和NaCl（0.14mol/L）溶液中的溶解度是怎样的？NaCl溶液中加入EDTA-Na有何作用？2、本实验中SDS有何作用？氯仿-异戊醇又有何用途？3、本实验需多次离心，多次离心的目的的分别是什么？4、本实验提取的DNA是否为纯品？5、肝脏行鲜或在4°C条件下保存多天还能否用作实验材料？为什么？6、为什么肝脏匀浆要充分（研磨要充分）？实验八聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）分离血清蛋白质（核黄素一TEM

2、ED聚合系统）（I）凝胶制备1、胶制备的原理是什么？2、化学聚合和光聚合各有何特点？3、光聚合加入核黄素、TEMED各有何作用？4、氧的存在对凝胶聚合有何影响？如何除去溶解氧？5、凝胶浓度和交联度与孔径大小有何关系？柱状胶是指什么样的胶？6、凝胶制备时在制胶架凹槽中滴1—2滴蔗糖液的作用是什么？7、在称量Acr、Bis时应注意哪些问题？在制胶时应注意哪些问题？8、如何判断凝胶（浓缩胶、分离胶）聚合是否完成？9、T、C值的含义？如何根据T值计算出C值及Acr、Bis的用量？实验九聚丙烯酰胺凝胶电泳

3、法(PAGE)分离血清蛋白质(核黄素—TEMED聚合系统)(II)电泳分离1、电泳的原理是什么？2、盘状电泳的过程有哪三种物理效应？3、电泳基质的四个不连续时指的是什么？4、本实验中样品液应如何制备？样品胶通常可用什么代替？5、安装凝胶管时应注意哪些问题？6、如何确定电泳终点？剥胶时应注意哪些问题？7、为什么电极缓冲液的下槽液不能用于上槽？8、剥出的凝胶条通常需固定，为什么？固定往往与哪个操作可同时进行？实验十蛋白质分子量测定一凝胶过滤层析法(II)分子量测定1、凝胶层析法的原理是什么？2、加样

4、时应该注意哪些问题？3、恒流泵的转速如何矫正？4、核酸蛋白检测仪，部分收集器、记录仪应该如何使用？5、蛋白质分子量标准曲线如何制作？6、试分析：如果只给你层析柱和凝胶，而没有核酸蛋白检测仪和部分收集器，也没有记录仪，此实验能否完成？如何完成？实验十琼脂糖凝胶电泳法分离LDH同工酶及血清LDH总活力的测定（I）LDH同工酶分离1、什么是同工酶？LDH催化发生什么样的反应？2、琼脂糖凝胶板如何制备？3、本实验的滤纸桥与醋酸纤维薄膜电泳的滤纸桥的搭法有何异同点？4、显色是非常关键的操作步骤，显色时应注

5、意哪些问题？5、为什么叫酶专一性染色？试分析之。6、试分析：LDH同工酶分离可否用薄膜电泳或PAGE电泳？实验十二琼脂糖凝胶电泳法分离LDH同工酶及血清LDH总活力的测定（II）LDH总活力的测定1、LDH总活力的测定的原理是什么？本实验方法是利用顺向反应还是逆向反应？2、LDH总活力的测定中用哪些注意事项？3、本实验中酶活性的定义是什么？你能否重新给一个定义？4、测定LDH活力是要在37°C条件下保温15min,这15min时间计时是否要准确？为什么？5、你是如何理解LDH总活力计算公式的？（

6、与酶的定义联系起来进行分析）