茉莉酸甲酯对高山红景天愈伤组织中红景天苷和多糖积累的影响

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1、茉莉酸甲酯对高山红景天愈伤组织中红景天昔和多糖积累的影响[摘要]目的:探明茉莉酸甲酯(MeJA)对高山红景天愈伤组织生物量及有效物质积累的影响,旨在为其产品生产提供一种新的材料来源。方法:在3L气球型气升式生物反应器内培养高山红景天愈伤组织20d后添加MeJA,研究了MeJA处理时间及浓度对愈伤组织生物量、红景天昔和多糖积累及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性的影卩向。结果:用125umol?L-l的MeJA处理时发现0〜6d愈伤组织生物量无明显变化,但超过6d后显著减少,MeJA处理4d时红景天昔和多糖的含量及生产量最高,同时SOD和POD活性达最大。MeJA浓度对愈伤组织

2、生物量和活性物质积累影响很大,浓度超过125Hmol?L-l时愈伤组织生物量明显减少;红景天昔和多糖的最大积累量分别出现在225,275umol?L-l的MeJA浓度处理。对SOD和POD活性测定结果发现,在MeJA225卩mol?L-l处理中出现峰值。对高山红景天愈伤组织中红景天昔及多糖含量与野生植株进行比较的结果,愈伤组织中红景天昔和多糖含量显著高于植株的根和茎叶,愈伤组织中红景天昔的含量分别是根、茎叶的1.1倍、2.4倍;多糖含量分别是根、茎叶的3.6,8.0倍。结论:高山红景天愈伤组织在气球型气升式生物反应内培养20d后加入225Umol?L-l的茉莉酸甲酉旨后继续培养4d有利于红景

3、天昔及多糖的积累,且这两种活性物质的含量明显高于野生植株。因此,通过生物反应器培养愈伤组织是一种获得大量高山红景天活性物质的有效方法,可作为高山红景天产品生产的另一原材料来源。[关键词]茉莉酸甲酯;红景天昔;多糖;酶活性高山红景天RhodiolasachalinensisA.Bor又名红景天,库页红景天,景天科红景天属多年生草本植物,是长白山珍惜药用植物之一,以根及根茎入药[1],具有抗缺氧、抗辐射,提高免疫、抗病毒[2]等药理作用,其主要的活性物质是红景天昔、多糖类、黄酮类、酚类、挥发油⑶等。近年来,随着对红景天药理功效研究的不断深入,其功能也广泛地被人们所了解,导致市场需求量逐年增加。目

4、前,高山红景天的野生资源已濒临枯竭,且在人工栽培方面由于其适合在高寒干燥的环境中生长、不耐高温、极易发生病害,难以满足市场的需求量⑷。因此利用植物细胞培养工程手段来获得植物代谢产物的研究已越来越受关注,生物反应器的应用是大量获得代谢产物的重要途径。然而在生物反应器培养过程中,往往利用诱导子来刺激植物代谢产物的合成。茉莉酸甲酯在植物代谢过程中起诱导信号传导作用[5],有效刺激植物代谢产物的生物合成,可引起植物代谢产物的迅速积累[6]。在许多研究中茉莉酸甲酯作为一种诱导子可显著的提高代谢产物产量,杨英等⑺发现,茉莉酸甲酯对胀果甘草细胞的生长有抑制作用,但是能够促进甘草总黄酮产量的增加;王学勇等⑻

5、认为MeJA能显著促进丹参毛状根中丹参酮类成分的积累并向培养基中释放。对于高山红景天,在悬浮培养中利用茉莉酸甲酯作为诱导子获得大量的代谢产物还尚未见相关报道,因此本试验用反应器内培养20d的愈伤组织为材料,探明了加入茉莉酸甲酯处理时间及浓度对高山红景天愈伤组织中红景天昔和多糖含量积累的影响以及对SOD和POD活性的测定,旨在为提高红景天代谢产物提供一种新途径,为红景天药物的开发提供技术参考。1材料参照邵春绘等⑼方法获得愈伤组织并增殖,将增殖的愈伤组织(鲜重约20g)接种于含2L培养基的3L气球型气升式生物反应器中,培养基为MS+BA3.0mg?L-l+NAA0.3mg?L-l+蔗糖30g?L

6、-l,pH调节为5.8,在温度为(25±2)°C,光照强度为1600lx,每天光照16h条件下培养20d,将获得的愈伤组织作为本试验的试验材料。3L气球型气升式生物反应器,JA21002电子天平(上海精天电子仪器有限公司),PHS-3C型pH计(上海精密科学仪器有限公司雷磁仪器厂),YHW1103远红外快速干燥箱(天津市华北实验仪器有限公司),LG16-B离心机(北京雷波尔离心机有限公司),0.22um过滤器(直径13mm,北京英伟达科技有限公司),UV1102型分光光度计(上海天美科学仪器有限公司),高效液相色谱(SP-15CShimadzuCo.Japan),色谱柱ThermoScien

7、tific(4.6mmX250mm,5um,USA),紫外检测器(SPD-15C,ShimadzuCo.Japan),超声波提取器(TH-100QX,济宁市超声波仪器有限公司)。葡萄糖购于天津市科密欧化学试剂有限公司(批号20120206),红景天昔标准品购于成都曼斯特生物科技有限公司(批号MUST-12102401)o2方法2.1茉莉酸甲酯处理天数对高山红景天愈伤组织生物量和有效物质积累的影响反应器培养20

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