果蝇唾腺染色体制片

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1、果蝇唾腺染色体制片实验药品配置：0.7%生理盐水:称取NaCl0.73g,KCI0.035g,CaCI20.02lg,溶于100ml蒸镭水中（要充分溶解，防止产生沉淀）10%的苯酚品红染液：原液A:称取0.3g碱性品红溶于10ml70%酒精中（此液可长期保存）原液B:取1ml原液A加入9ml5%苯酚水溶液,再加入lml37%的甲醵溶液吸取10ml的原液B,再加入9ml45%的醋酸即配成含有原液B10%的苯酚品红染液。（放置2周后使用染色能力显著增加）净化染液：背景净化液：4ml30%盐酸溶于5ml45%醋酸染色

2、液：20ml10%的苯酚品红染液中加7ml乳酸冲洗液：9.8m!45%醋酸加入0.1ml卬醛，0.1ml乙醇，0.04g苯酚冲洗液（现配现用）：Imol/L盐酸5ml、10%偏重亚硫酸钠5ml,蒸徭水100ml结晶紫染液1：取0.9g结晶紫与9.1ml蒸慵水中，配制成9%的染色液，装于棕色瓶中。结晶紫染液2：往20ml结晶紫染液2中加7ml乳酸，装于棕色瓶中。番红染液：番红2.5g、95%酒精100ml取上述配好的番红酒精溶液10ml与8ml蒸锢水混匀即成。美蓝染液:A液：美蓝0.6g、95%酒精30mlB液：

3、KOHO.Olg、蒸憾水100ml分别配制A液和B液，配好后混合即可。试剂NaClKCICaCl2碱性品红酒精苯酚甲醛、CH3COOH、HCL乳酸无水乙醇偏重亚硫酸钠结晶紫番红美蓝KOH实验步骤①材料的准备：实验前2天可再加少许酵母粉，且控制好温度，不能超过25°C,—般在15〜20°C,保证幼虫肥大。在超净工作台中用接种环挑取试管或三角瓶壁上的行动迟缓、肥大、即将化蛹的三龄幼虫。①取唾腺：将肥大的三龄幼虫，置于干净的培养皿中，先用0.7%生理盐水洗脱幼虫体上的培养基，再将三龄幼虫置于滴有一滴生理盐水的载玻片上

4、。在黑色底板操作台下，左右手各拿一枚大头针，左手压住幼虫离后端1/3处，右手大头针插入幼虫口器中水平向右拉,幼虫被拉断，唾腺连在头部部分也随之被拉出，为一对半透明而微白的长形小囊，常在一侧附一条白色脂肪。②解离：将分离唾液腺分离出來后，小心去除其它组织及唾液腺周围片色的脂肪。分别用1〜2滴lmol/LHC1；lmol/LHCl和10%CH3COOH作为细胞解离液解离3min。用吸水纸小心吸去解离液，倾斜载玻片，用蒸懈水慢慢再次冲洗，重复3〜4次，洗净残留的HC1。③滴上1〜2滴背景净化液约5〜10秒后，用冲洗液

5、和蒸憾水彻底冲掉背景净化液。④染色：加1〜2滴改良苯酚品红染液，染色30min,再用冲洗液冲掉染色液。⑤压片：染色后用蒸馆水冲洗染液并用进行压片。⑥观察：先在低倍镜下找到唾腺染色体，再换成高倍镜观察染色体的形态和横纹结果。注意事项：①实验材料必须为三龄幼虫，若用二龄幼虫则唾腺较小，不能达到理想的效果。②HCI解离时间是实验成功的关键因素：HC1解离时间过短，细胞与细胞之间结合较紧密，压片时容易重叠，染色体臂不易展开，过长染色体容易发生断裂而导致染色体丢失。经多次实验发现盐酸解离时间在3min左右制片效果较好。③

6、压片时注意不要使盖片移动，用力和揉动一个方向，次数不宜太多，否则易把细胞内容物揉碎，看不到染色体。预期结果光学显微镜下果蝇唾液腺改良苯酚番红染液（希望大家能做出更好的）结晶紫美兰染液