新基因工程专题复习

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1、专题复习《基因工程》例题1：科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性核酸内切酶II的识别序列和切点是—↓GATC—，据图回答：（1）基因工程的操作程序主要包括的四个步骤是①、②、③、目的基因的检测和表达。过程①是通过方法获得的目的基因，需要在的作用完成。获得目的基因还可以有哪些方法、。（2）在构建基因表达载体过程中，应用限制性核酸内切酶　切割质粒，用限制性核

2、酸内切酶　切割目的基因。限制性核酸内切酶切割的是键。①请画出质粒被限制性核酸内切酶切割后所形成的黏性末端。_____________________________________________________________________②请画出目的基因两侧被限制性核酸内切酶切割后所形成的黏性末端。__________________________________________________________________________③上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接?为什么?______要使两个不同的DNA分子完全连接起来还需要

3、酶连接，连接的是键。（3）右为该质粒表达载体简图，ampR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点。①请你判断一目的基因插入在了图示位置？②由此可见一个完整的基因表达载体应该包括哪些组成？③目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是，其合成的产物是。ab（4）在过程③一般将受体大肠杆菌用_________处理，以增大　　　　　的通透性，使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。（5）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上得到如下图a的结果（黑点表示菌落），能够生长的细菌中已导入了，反之则没有导入；再将

4、灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图b6的结果（空圈表示与a对照无菌落的位置）。与图b空圈相对应的图a中的菌落表现型是，这些细菌中导入了________________。（6）人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为。写出目的基因导入细菌中表达的过程。变式1：下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有个游离的磷酸基团。（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越

5、。（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是。（4）与只使用EcoRI相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止。（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入酶。（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了。（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。变式2、图为某种质粒表到载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素

6、抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。据图回答：（1）将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用ＤＮＡ连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有、、三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行。（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是；（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的

7、位点是，其合成的产物是（3）在上述实验中，为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是。6例题2：苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图(为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。(1)将图中①的DNA用HindIII、BamHI完全酶切后，反应管中有种DNA片段。(2)图中②表示HindIII与BamI酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得种重组质粒；如果换用Bstl与BamHl酶切，目的基因与质粒连接后可获得种重组质粒。(3)目的基因插人质粒后，不能影响质粒的

8、。(4)图中③的Ti质粒调控合成的vi