实习三+病原物的接种

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1、实习三植物病原物的接种一、目的意义学习植物传染性病害研究中常用的接种方法，了解不同接种方法、不同的外界环境条件对病害发生发展过程的影响。二、材料与仪器玉米小斑病菌分生孢子，显微镜、血球计数板、无菌水、喷雾器、记号笔、剪刀、试管、标签等(一)植物病害人工接种方法人工接种方法是根据病害的传染方式和侵染途径设计的，植物病害的种类很多、其传染方式和侵染途径各异，因此接种方法也不相同。三、实验内容和方法(1)拌土法(小麦根腐病)拌土法适于土壤传染的病害，方法是将消毒的土壤分别装入两个小花盆中，其中一盆表层覆以一厘米厚的菌土，菌土是用玉米砂培养菌1份加消毒土5份混合而成，另一盆不接种(不覆菌土)作为对照

2、。将经0.1%升汞表面消毒3分钟并用无菌水洗3次的小麦种子，分别播种在两个花盆内，插上标牌，注明接种日期，方法病害名称及接种人姓名，花盆放在室温下，浇水保湿，遮阴管理，待幼苗出土展开叶子后(大约一周)，观察并记载根腐病发生情况(2)喷雾法(稻瘟病)气流及雨水传播的病害常用此法接种，将在高粱粒培养基上培养好稻瘟病菌株，装在加有无菌水的烧杯中，用力搅拌，待孢子洗下后，以纱布过滤，并于滤液中加入吐温20，配成孢子悬浮液，用喷雾器均匀喷布在稻苗上。同时设一不喷菌液而喷无菌水的作对照，保湿48小时，移到温室中正常管理，7天后作发病调查。(3)涂抹法(小麦秆锈病)这也是气传病害常用的接种方法，用于禾本科

3、锈病的接种。方法是用食指沾锈菌夏孢子悬液自下向上轻轻涂抹欲接种的小麦叶片，也可先用手指沾水摩擦叶片，使叶表有一层水膜，然后将夏孢子粉抹在上面，以不涂抹孢子悬液或孢子粉的作为对照。用塑料罩保湿12小时后揭布，正常管理，7天后作发病调查。(4)创伤接种法(大白菜软腐病)适用于由伤口侵入的弱寄生菌。方法是取切成适当大小的白菜帮两块、经水洗，待水稍干后，以10%漂白粉溶液作表面消毒，分别放在两个灭过菌的上下铺有吸水纸的培养皿中，用酒精擦过的玻璃棒顺着白菜帮打三排不穿透的孔穴。将培养好的白菜软腐病菌斜面菌种以无菌水冲洗，配成菌悬液。然后，先以灭过菌的注射器吸取无菌水滴于菜帮的第一排孔内作为对照，再用该

4、注射器吸菌液滴于第二、三排孔内。注意无论无菌水、还是菌液都不要滴的过多，以免流出孔穴，另一培养皿的菜帮以同法处理作为重复，盖好皿盖，置于26-28℃的温箱中，24小时后检查发病情况。（5）拌种法和浸种法接种种传病害可采用此两种方法。(二)接种试验的观察和记载：认真观察和记录是做好接种试验的重要环节，为了及时正确地分析总结试验结果，必须认真观察并做详尽的记录，如记录接种时间，接种植物、品种、接种方法、部位、接种用的病菌名称(包括菌系和生理小种)、来源、繁殖和培养方法(培养基、培养温度、培养时间)、接种体浓度、接种的方法和步骤及接种后的管理等。玉米小斑病菌接种方法：喷雾法在玉米培养基上接种玉米

5、小斑病菌，待孢子产生后加入灭菌水，用玻棒将分生孢子洗下，配成浓度为低倍镜下每视野20-50个孢子的悬浮液，用喷雾器喷洒在玉米的叶片上，保湿24h后每天观察一次，观察是否发病以及病斑发展状况。记载接种日期，推算潜育期，发病阶段开始是否出现褪色小斑点，病斑扩大后注意病斑大小、形状和颜色。