2019-2020年高中生物选修1DNA的粗提取与鉴定

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1、2019-2020年高中生物选修1DNA的粗提取与鉴定教学目的1．初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法。2．观察提取出来的DNA物质。实验原理1．DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。DNA在0．14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。2．DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA。3．DNA＋二苯胺蓝色（用于DNA的鉴定）实验步骤1．材料制备0.1G/ml柠檬酸钠100ml500ml烧杯→玻璃棒搅拌→1000r/min离心2min→吸去上清液→活鸡血180ml即得鸡血细胞液（

2、也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡血细胞自行沉淀）2．方法步骤取血细胞液5-10ml＋20ml蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速搅拌（1）提取血细胞核物质纱布过滤，滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞破裂（2）溶解核内DNA：滤液＋2mol/LNaCl溶液40ml，玻璃棒沿一个方向搅拌（3）析出含DNA的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液相当于稀释到0．14mol/L）（4）滤取含DNA的粘稠物：用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上

3、（5）DNA粘稠物再溶解：20ml2mol/LNaCl溶液50ml烧杯，上述粘稠物缓慢搅拌3min（6）过滤含DNA的2mol/LNaCl溶液：用2层纱布过滤，滤液中含DNA（7）提取含杂质较少的DNA：上述溶液＋95%酒精，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝装物卷起。（8）DNA鉴定：实验关键：本实验成功的关键是获取较纯净的DNA，因此应注意：1．充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以后，应用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出DNA2．沉淀DNA必须用冷酒精。实验前必须准备好大量95%的酒精，并在冰箱中（5℃以下）至少存放2

4、4小时。3．正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第（3）、（5）步骤，玻璃棒不要直插烧杯底部，且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。在步骤（7），要将玻璃棒插入烧杯溶液中间，用手缓慢转动5-10min。【同类题库】．在“DNA的粗提取与鉴定”的实验中分别使用2mol／L、0．14mol／L、2mol／L、0015mol／L的氯化钠溶液，其作用分别是（A）A．溶解、析出、溶解、溶解C．溶解、溶解、析出、溶解B．析出、溶解、析出、溶解D．溶解、析出、溶解、析出．下列图示中能反映DNA溶解度与NaCI溶液浓度之间关系的是（C）．DNA在下列哪种浓度的NaCl溶液中溶解度最低（B）A．2．00

5、mol/LB．0．14mol/LC．0．015mol/LD．0．10mol/L．在DNA的粗提取过程中，初步析出DNA和提取较纯净的DNA所用的药品的浓度和名称分别是（B）①0．1g/ml的柠檬酸钠溶液②2．00mol/L的NaCl溶液③0．14mol/L的NaCl溶液④体积分数为95%的酒精溶液⑤0．015mol/L的NaCl溶液⑥0．04mol/L的NaCl溶液A．①③⑤B．③④C．②④D．②③④．与析出DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是（C）A．操作时缓缓滴加蒸馏水，降低DNA的溶解度B．在操作A时，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证DNA分子完整C．加蒸馏水可同时降低DNA和蛋白质的

6、溶解度，两者均可析出D．当丝状粘稠物不再增加时，此时NaCl的浓度约为0.14mol/L.．（多选）下列有关“DNA粗提取”的操作中，正确的是（ABCD）A．在鸡血细胞液中加入蒸馏水B．在“析出DNA粘稠物”时，要缓缓加入蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增多C．在用酒精凝集DNA时，要使用冷酒精D．用玻璃棒搅拌时要沿一个方向．“DNA的粗提取与鉴定实验”中有三次过滤：（1）过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液。（2）过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl.（3）过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl.以上三次过滤分别为了获得（A）A．含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液B．含核物

7、质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含DNA的滤液C．含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布中DNAD．含较纯的DNA滤液、纱布上粘稠物、含DNA的滤液．为获取较纯净的DNA，采集来的血样可用蛋白酶处理，然后用有机溶剂除去蛋白质。下列有关叙述，正确的是（D）A．除去血浆中的蛋白质B．除去染色体上的蛋白质C．除去血细胞表面的蛋白质D．除去血细胞中所有的蛋白质．在“DNA的粗提取与鉴定实验”中，和“使用蛋白酶从染色体中提取DNA”中的蛋白酶具有相似作用的物质是（D）A．NaC