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1、食品微生物检验学实验指导课时分配及主要实验内容（总学时30,其中动检20,动食安30）实验1微生物检验常规试验预备3主要内容：菌落总数测定和大肠菌群检验所需的1）研钵、剪刀、铁子、吸管、平皿的包扎与干热灭菌；2）实验所需培养基（营养琼脂、EMB琼脂、乳糖胆盐发酵管）和生理盐水的配制、分装、包扎和高压蒸汽火菌。实验2菌落总数测定3主耍内容：1）样品的称取、匀浆和稀释；2）接种与琼脂倾注；3）24h后菌落计数及结果报告。实验3大肠菌群MPN测定3主要内容：1）样品的称取、匀浆和稀释；2）接种于乳糖胆盐发酵管，培养；3）24h后观察产酸产气情况，划线于EMB琼脂，培养；3
2、）48h时观察菌落特征，革兰氏染色、镜检；4）查MPN检索农，报告结果。实验4蜡样芽砲杆菌检验3主要内容：1）将细菌肉汤培养物划线于普通琼脂、MYP琼脂，点种于卵黄琼脂平板，接种生化培养基，培养;2）24h时观察菌落特征，革兰氏染色、镜检；3）观察主要生化试验结果。4）报告。实验5致病性球菌检验3主要内容：1）将金黃色葡萄球菌和链球菌肉汤培养物划线于普通琼脂、血液琼脂，接种牛化培养基，进行纸片法药散试验，培养；2）24h时观察菌落特征，革兰氏染色、镜检；3）观察主要生化试验结果和药敬试验结果。4）报告。实验6魏氏梭菌检验3主要内容：1）形态及染色特性观察；2）细菌厌
3、氧培养；3）家兔“泡沫肝”试验实验7霉菌检验2主要内容：1）观察曲霉、毛霉和青霉在PDA琼脂上的菌落特性;2）挑取霉菌培养物制备压片,在显微镜下观察需菌菌丝、抱子等结构。实验8肉的微生物学检验2主要内容：1）鲜肉的感官性状观察；2）鲜肉压印片制备与镜检、细菌计数；3）微生物毒素呈色反应。实验9乳的微生物学检验2主要内容：1）鲜乳的感官性状观察；2）乳的涂片制备与镜检、细菌计数；3）美兰还原试验。实验10食品中沙门氏菌的检验6主要内容：1）沙门氏菌检验所需培养基的制备；2）细菌分离与菌落挑选；3）细菌生化试验；4）血淸学鉴定；5）结果报告。实验一微生物检验常规试验预备
4、［目的与要求］1•熟悉菌落总数测定和大肠菌群检验所需的各种培养基的制备。熟悉高压蒸汽灭菌器的使用。2.熟悉玻璃器1111的包装与T热灭菌方法。［主要内容］:1硏钵、剪刀、锻子、吸管、平皿的包扎与干热灭菌。2实验所需培养基（营养琼脂、EMB琼脂、乳糖胆盐发酵管）和生理盐水的配制、分装、包扎和高压蒸汽灭菌。1）配制700mL生理盐水（0.9%NaCl）,分别分装与5个盐水瓶，每瓶90mL；分装18支试管，每管9mLo2）配制乳糖胆盐培养基（发酵管）200mL,并分装于小试管各3mL,每管屮加入一个充满培养基的小倒管，注意一定不能有气泡。（配方：2%蛋⑷东，0.5%猪胆盐
5、，1%乳糖，调pH7.4,然后加入0.4%澳甲酚紫2.5ml/100ml）3）配制普通琼脂培养基400ML,分装于2个三角瓶。（0.5%NaCl,1%蛋白腺,0.3%牛肉粉（膏）,pH7.4,琼脂粉1.5%）4）配制伊红美蓝培养基300mLo（配方：蛋口H东1%,NaCl0.5%,牛肉膏0.3%,pH7.4,琼脂粉1.5%,加热溶化示加入乳糖1%、2%伊红水溶液2mL/1000mL.0.65%美蓝1mL/1000mL）5）TTC培养基（1）2%乳糖发酵管40支,每管2.5ml（2%乳糖，2%蛋白月东）。（2）TTC培养液100ml（2%蛋白J］东，l%Nacl,l%
6、Na2HPO4.12H2O,0.4%十二烷基硫酸钠，PH7.4）（3）灭菌后加10%TTC8ml后分装于（1）,每管加2.5mL6）DC培养基（0.5%蛋白丿抹，0.5%Nacl,1%乳糖，0.3%K2HPO4.3H2O,0.2%柠檬酸铁钗,琼脂粉0.7%）溶于水后调PH7.2,加入10%去氧胆酸钠1ml及0.4%漠麝香草酚兰1.6ml。［思考题］I配制培养基时的一般原则和注意事项？2使用高压灭菌器和恒温干燥箱的注意申项？实验二菌落总数测定［目的与要求］通过本试验要求掌握食品的菌落总数测定的方法，菌落计数和报告方式，以及经常食用的各类动物性食品的菌落总数标准。菌落总
7、数是指食品检样经过适当处理，在一定的条件下培养后，所得lg或lmL检样中所含细菌菌落的总数，其也是判定食品被污染程度的标志。［实验器材及试剂］温箱、天平、灭菌试管、吸管、灭菌平皿、乳体、敢了和蹑子、稀释液、营养琼脂、显微镜、载玻片、革兰氏染色液，等。［实验内容］（一）检样稀释及培养：1.以无菌操作，将检样25g（或25mL）剪碎放于含有250mL（或225mL）灭菌生理盐水或英他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数虽的玻璃珠）或灭菌乳体内，经充分振摇或研磨作成1：10的均匀稀释液。2.用ImL灭菌吸管，吸取1：10稀释液ImL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管中
