【精品】常用培养基

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1、1前言近几十年來，极端环境微生物引起了人们的极大的兴趣，极端环境微生物的研究逐渐成为生命科学的研究热点。在极端环境下，生存有独特的微生物,与普通微生物相比，可能存在着不相同的代谢途径和遗传背景，具有多方面的潜在利用价值，吸引着人们去探索、研究和开发。酸性环境微生物(包括嗜酸微生物及耐酸微生物)就是一类极其重耍的极端环境微生物。口然界大多数环境的pH值为5—9,它适合多数微生物生长。嗜酸菌是一种能在低pH条件下生长和繁殖的极端环境微生物，通常在pH2—5生长很好,pH5.5以上生长不好［1>7>9113Jo有些嗜酸菌在屮性pH条件下根本

2、不生长，如氧化硫硫杆菌(Thiobacillusthiooaidans),酸热硫化叶菌｛Sulfolobusacidocaldarius),酸热芽抱杆菌｛Bacillusacidocaldarius)等，最佳生长pH是2.0一3.0,这些都是专性嗜酸菌。一些真菌也能在pH5.0或更低条件下生长，实际上是耐酸菌⑼。嗜酸微生物种类丰富，在三域生命屮存在嗜酸类群，在某些酸性环境屮真核生物比原核生物具有更高的多样性⑺。极端嗜酸菌(Acidophiles)能生活在pH1以下的环境，有些甚至可以生活在pll低于0的环境中。而耐酸微生物还可生长于中

3、性环境中。酸性环境微生物广泛分布于酸性矿山废水、生物沥滤堆以及含硫温泉和土壤，火山区域含硫量极为丰富的地区。对酸性环境微生物应用研究较多的是无机化能门养型嗜酸菌，这些嗜酸菌氧化Fe2元素硫以及硫化物矿物的生理特性，被用在冶金、环保和农业等领域。用细菌从矿石中提取金属称作细菌浸出或生物湿法冶金，并在在冶金工业上获得成功应用伽。多数酸性环境微生物，特别是无机自养型细菌，它们在低品位矿生物沥滤冋收贵垂金属，原煤脱硫及环境保护等方面有着巨大的优越性和潜在应用价值。其中嗜酸热古细菌述是耐高温酶的重要来源，对它们的研究和应用无疑将开拓酶工业新的

4、领域。此外，酸性环境微生物还被广泛应用到重金展污染土壤的生物修复、硫铁矿烧渣的综合治理、厌氧废水处理系统中1応的去除以及煤和石油中硫的脱除等方面［l0tl21o对酸性环境微生物的次级代谢产物研究报道较少，近年研究人员发现，酸性环境微生物也可以发现化学结构新颖，作用机理崭新的生物活性物质。美国的研究者从酸性矿山废水屮分离到微生物，以海虾致死法等方法确定活性菌株，分离得到具有抗肿瘤活性的BerkelicAcidf221,BerkeleydioneandBerkeleytrione1201,等新化合物。这说明酸性环境微生物也是新颖生物活性物

5、质的重耍来源。1R)=H,R2=H2Ri=Me.R，2=H3Rj=Me,R^=AcBerkelicAcidBerkeleydioneandBerkeleytrione木实验室近年来致力于微牛物活性次级代谢产物的研究，在极端环境微生物次级代谢产物方面做了较多工作，积累了一定经验。酸性环境微生物的活性次级代谢产物研究，国内未见有报道，国际上也报道极少。因此，本实验室开展了耐酸微生物活性物质的研究。本论文即以采自云南建水锚矿（包括矿区土壤）与紫陶土壤为样品，进行耐酸微生物分离、纯化，TLC排重，并采用小鼠白血病细胞P388测试其抗肿瘤活性，

6、为进一•步活性代谢产物研究奠定基础。2实验部分2.1耐酸微生物的分离2.1.1实验材料2.1.1.1样品来源木实验采用的样品为云南建水镒矿（包括镒矿土壤）与紫陶土壤，共17个样品。2.1.1.2培养基配方1、PDA培养基土豆20%蔗糖2%琼脂2.3%氯霉素0.02%pH2.0（土豆切丁煮沸20min,纱布过滤，滤液定容：侮200g土豆定容1000ml水）2、高氏一号培养基Kg0」％NaCl2%FeS04.7H200.001%可溶性淀粉2%K2HP0t0.05%MgSOj0.05%琼脂2.3%PH2.03、牛肉膏一蛋白月东培养基蛋白月东

7、1.0%NaCl0.5%牛肉膏0.5%琼脂2.3%PH2.02.1.1.3实验主要设备与仪器培养皿、试管若T，三角瓶：200ml>300ml>500ml>1000ml天平：美国赛多利斯公司BP121S型高压灭菌锅恒温培养箱MLS375OSANYOMIR-253SANYO洁净工作台AirTech苏州安泰空气技术有限公司2.1.1.4实验试剂麦芽糖B.R.甘露醇B.R.牛肉膏B.R.蛋白月东B.R.硫酸镁A.R.氯化钠A.R.琼脂A.R.味精A.R.葡萄糖A.R.盐酸A.R.蔗糖A.R.磷酸二氢钾A.R.磷酸氢二钾A.R.七水合硫酸亚铁A

8、.R.2.1.2实验方法2.1.2.1样品分类建水紫陶土壤红色样r红色样2R黄土白土(砂)紫土里士•五色混和泥建水紫陶半成品样建水镒矿土壤1号样2号样3号样建水锚矿放电猛(MnO2)放电猛(Mn02)2s放电猛(MnO2