信欣环境微生物学实验指导书

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1、环境微生杨学实殓指导书成都信息工程学院资源环境学院2011年2月实验光学显微镜的操作、微生物的形态观察实验二微生物的染色技术6实验三培养基的制备和灭菌9实验四土壤（水）中细菌的接种和培养技术15实验五微生物培养物的特征观察、计数和纯培养物的分离纯化……19实验一光学显微镜的操作以及微生物的形态观察一、实验目的（一）了解光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。（二）观察细菌的个体形态，学会生物图的绘制。（三）掌握压滴法制作标本的方法。（四）通过显微镜观察，认识细菌的基木形态及特殊结构。二、实验仪器、材料光学显微镜，目测微计、物测微计，香柏汕、二甲苯，擦镜纸、吸水纸，细菌、示范片

2、，活性污泥混合液等。三、显微镜的结构、光学原理及其操作方法（一）显微镜的结构（图1）和光学原理显微镜分机械装置和光学系统两部分。1.机械装置（1）镜筒：镜筒上端装目镜，下端接转换器。镜筒有单筒和双筒两种。单筒有肓立式（长度为160mm）和后倾斜式（倾斜45°）o双筒全是倾斜式的，其中一个筒有畑光度调节装置，以备两眼视力不同者调节使用。两筒之间可调距离，以适应两眼宽度不同者调节使用。（2）转换器：转换器装在镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个或5个孔。不同规格的物镜分别安装在各孔上。（3）载物台：载物台为方形（多数）和圆形的平台，屮央有一光孔，孔的两侧各装1个夹片，载物台上还有移动器（其上

3、有刻度标尺），可纵向和横向移动，移动器的作用是夹住和移动标本用。（4）镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。镜臂有固定式和活动式（可改变倾斜度）两种。（5）镜座：镜座为马蹄形，支撑整台显微镜，其上有反光镜。（6）调节器：调节器包括大、小螺旋调节器（调焦距）各一个。可调节物镜和所需观察的物体之间的距离。调节器有装在镜臂上方或下方的两种，装在镜臂上方的是通过升降镜臂来调焦距，装在镜臂下方的是通过升降载物台来调焦距，新式显微镜多半装在镜臂的下方。1.光学系统及其光学原理图1显微镜的结构（1）冃镜：每台显微镜备有3个不同规格的冃镜，例如，5倍（5X）、10倍（10X）和15倍（15X）,高

4、级显微镜除了上述三种外，还有20倍（20X）的。（2）物镜：物镜装在转换器的孔上，物镜冇低倍（8X、10X、20X三种）、高倍（40X或45X）及汕镜（100X）o物镜的性能由数值孔径（NumericfLlAperture,N.A.）决定，数值孔径=n.sina/2,-KS为玻片和物镜之间的折射率乘上光线投射到物镜上的最大夹角的-半的正弦。光线投射到物镜的角度越大，显微镜的效能越大，该角度的大小决定于物镜的直径和焦距。n是影响数值孔径的因素，空气的折射率n=l,水的折射率n=1.33,香柏油的折射率n=1.52,用油镜时，光线入射a/2为60°，则sin60=0.87。从图2可知：以空气

5、为介质时：N・A.=1X0.87=0.87以水为介质时：N.A.=1.33X0.87=1.16以香柏油为介质时:N.A.=1.52X0.87=1.32显微镜的性能还依赖于物镜的分辨率，分辨率即能分辨两点Z间的最小距离的能力。分辨率用6表示，6=0.61XVN.A（九为波长），分辨率与数值孔径成正比，与波长成反比。增大数值孔径，缩短波长可捉髙显微镜的分辨率，使目的物的细微结构更清晰可见。事实上可见光的波长（0.38〜0.7呵）是不可能缩短的，只冇靠增大数值孔径來提高分辨率。物镜上标有：N.A.1.25>100X、“01”、160/0.17、0.16等字样,其中N.A.1.25数值孔径,10

6、0X为放大倍数,“160/0.17”中160表示镜筒长,0.17表示要求盖玻片的厚度。"01”表示油镜,（即OilImmersion）,0.16为工作距离。显微镜的总放人倍数为物镜放大倍数和目镜放人倍数的乘积。（3）聚光器：聚光器安装在载物台的下面，反光镜反射来的光线通过聚光器被聚集成光锥照射到标本上，可增强照明度，提高物镜的分辨率。聚光器可上、下调节，它中间装有光圈可调节光亮度，在看高倍镜和油镜时需调节聚光器，合理调节聚光器的高度和光圈的人小，可得到适当的光照和清晰的图像。（4）反光镜：反光镜装在镜座上，有平、凹两面，光源为白然光时用平面镜，光源为灯光吋用凹而镜。它可自山转动方向。反光

7、镜可反射光线到聚光器上。（5）滤光片：自然光由各种波长的光组成，如只需某一波长的光线，可选用合适的滤光片，以提高分辨率，增加反差和清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等颜色。根据标木颜色，在聚光器下加相应的滤光片。（二）显微镜的操作方法1.低倍镜的操作（1）置显微镜于固定的桌上。窗外不宜有障碍视线之物。（2）旋动转换器，将低倍镜移到镜筒正下方，和镜简对直。（3）转动反光镜向着光源处，同时用眼对准目镜（选用适当放人倍数的目镜）仔