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1、第8章RNA的转录合成Section8RNATranscription原核生物RNA的转录真核生物RNA的转录RNA转录的抑制作用1原核生物RNA的转录RNATranscriptioninProkaryotes转录的基本原则BasicPrinciplesofTranscription大肠杆菌RNA聚合酶EscherichiaColiRNAPolymerase大肠杆菌δ70启动子TheE.coliσ70promoter转录的起始,延伸与终止Transcription,initiation,elongationandterminat
2、ion2转录:以DNA为模板,在依赖于DNA的RNA聚合酶催化之下的一系列RNA酶促合成过程叫做转录,包括RNA链的起始、延伸、终止等步骤。转录的基本原则BasicPrinciplesofTranscription3AntisensestrandSensestrandAntisensestrandSensestrand4大肠杆菌RNA聚合酶E.coliRNAPolymerase155kDa36.5kDa151kDa11kDa36.5kDa70kDaHoloenzyme全酶核心酶51α亚基:核心RNA聚合酶有2个α亚基,由rpoA
3、基因编码.功能：1）参与RNA核心酶的组装,尚未发现有明确的转录功能。2）参与全酶和启动子的牢固结合。3）当RNA聚合酶核心酶沿着模板移动进行RNA链的延伸时,保证DNA双螺旋的不断地在前面解开,在后面恢复双螺旋。62β亚基:是RNA聚合酶的催化中心,由rpoB基因编码.可能含有两个结构域,分别负责转录的起始和延伸.具体是：结合核苷酸底物并催化磷酸二酯键形成证据:(1)抗生素利福平:与β亚基结合,阻止RNA聚合酶转录的开始;(2)利迪链菌素也与β亚基结合,抑制转录延伸.73β’亚基:是RNA聚合酶的催化中心，由rpoC基因编码,
4、负责核心酶与模板DNA的结合。84σ因子:大肠杆菌中最常见的σ因子是σ70.特性:（1）与核心酶结合形成了全酶,在启动子识别中起关键性的作用；（2）原核生物含有多种σ因子，以能识别各种类型的启动子；（3）RNA链延伸至8-9nt时，σ因子就离开核心酶；（4）σ因子数量只有核心酶的30%，因此在任何时刻只有1/3的聚合酶是全酶。95ω亚基：ω亚基的功能尚不清楚,也有人认为ω亚基对于RNA聚合酶的结构和功能没有太大的影响。10大肠杆菌σ70启动子TheE.coliσ70promoter1.σ70在基因中的位置及序列为了方便,人们将m
5、RNA开始转录的一个碱基(转录起始点)定为+1,沿转录方向顺流而下均用正值表示;溯流而上的启动子部分,均用负值表示。112.σ70的特征大小40-60bp;-10序列,也叫pribnow框,含有保守序列TATAAT,其中带底线的称为保守T,它存在于目前已知的几乎所有启动子中,一般位于－6(5)到－9(8).该序列是聚合酶启动DNA解旋的序列.122.σ70的特征(续上)-35序列,也叫Sextama框,也是RNA聚合酶覆盖的部分。RNA聚合酶依靠其σ亚基识别该位点,因此又称为RNA聚合酶识别位点。其保守序列为TTGACA。132
6、.σ70的特征(续上)启动子区域的共同功能:(1)-35序列组成增强与聚合酶σ因子相识别和相互作用的识别区；(2)-10序列直接影响DNA的解旋速度；TTGACA…..16-18bp…..TATAAT…5-8bp...CG/AT-35sequence-10sequence+114启动子效率-10序列和-35序列之间距离的改变影响启动子的活性。间隔17bp活性最强（16-18，15-20bp）弱启动子没有-35序列。如：lac启动子，lac基因的表达需要一个辅助激活因子受体蛋白CAP(cyclicAMPreceptorprotei
7、zod)与靠近启动子上的CRP位点结合，以增强启动子与RNA聚合酶的结合从而进行转录起始。15转录的起始、延伸与终止Transcription,Initiation,ElongationandTermination1启动子结合Promoterbinding2DNA解旋DNAunwinding3RNA链起始RNAchaininitiation4RNA链延伸RNAchainelongation5RNA链终止RNACHAINTERMINATION6依赖的ρ转录终止Rho-dependenttermination161.Promoter
8、binding2.DNAUnwindingandinitiation三聚复合物闭合复合物开放复合物3.ElongationDNA解旋区(转录泡)1712bp17bp3.Elongation18Termination(1)不依赖ρ因子的转录终止(Rho-indep
