灵芝总三萜纯化工艺的研究

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1、灵芝总三砧纯化工艺的研究摘要：采用大孔树脂纯化方法优选出纯化灵芝中总三话的工艺。方法：D101大孔吸附树脂进行纯化，用醇-水梯度洗脱。灵芝样品浓缩液100mL(0.5s/mL)_E大孔树脂柱(D15mmXH120mm,干重50g),用蒸憾水1000mL.60%乙醇800mL.90%乙醇500mL依次洗脱，灵芝总三祜酸富集于90%乙醇洗脱液部分，且除朵质能力强•通过大孔树脂富集与纯化后的灵芝总三菇洗脱率达90.6%,90%乙醇洗脱液干燥后总固物中灵芝总三祜纯度可达20.3%o为此，采用此法可较好地纯

2、化灵芝总三帖。关键词：灵芝；总三菇；纯化屮图分类号：TQ28文献标识码：A文章编号：1009-8631(2012)04-0119-021概述灵芝是重要夯用材料之一，在我国具有巨大的知名度，灵芝属于真菌界、伞菌亚门、担子菌门、伞菌纲、多孔菌目、灵芝科、灵芝属［1］。灵芝多长于森林屮，如腐朽的树桩等。明代药学家李时珍的《本草纲目》对灵芝的种类、颜色、气味、功效等做了比较详细的描述。在我国，主要分布于四川、贵州、山西、江苏、浙江、云南、山东、江西、广西、福建、台湾、湖南、安徽、海南、吉林以及河北等地［2

3、］。2000版的《中华人民共和国药典》把灵芝列为药用菌［3］。灵芝的药理活性及功效己被广大人们所认可。20世纪50年代以來，随着人工培育灵芝的成功以及口后发展起来的发酵培养灵芝菌丝体的技术，灵芝的开发应用已经趋于大众化。市场上以灵芝为原产品也越来越多。2灵芝化学成分和生物活性各种文献及实验研究证明灵芝具有多种药理作用，女口：抗肿瘤、调节免疫功能、保肝、降血糖、降血压等等［4］。灵芝中所含的化学成分比较复杂，到目前为止，己经在灵芝中分离岀了近200种化合物，分为多糖类化合物、三菇类化合物、核营类、吠

4、喃衍牛物、牛物碱类、氨基酸多肤类、当醇类等十人类，而在灵芝中最主要的化学成分是多糖类化合物及三帖类化合物［5］,是最主要的功效成份，因此一直也是研究的重点。3灵芝三砧的提取、纯化和分离研究概况3.1三祜类化合物的提取方法灵芝屮三祜类成分的分离及分析检测的方法很多，但各有其使用范围。选择最合适的提取分离及分析测定方法，除了耍考虑分析的三诂类成分的结构性质外，还要考虑别的成分对它的干扰。因此，在实验室实际应用中应根据具体情况进行具体分析，确定最佳的提取分离及分析测定方法。灵芝三砧的提取方法有很多，例如

5、有机溶剂提取法，超声波提取，临界流体萃取(SFE)等，其中最常用的是冇机溶剂提取法。因为灵芝三砧是脂溶性的物质，而且其结构中含有轻基，使得此类物质具有一定程度的极性，根据相似相溶的原理及来源广泛和价廉等特点，本文选用乙醇作为提取溶剂，可用常规的冋流提取进行。3.2三祜类化合物的分离纯化方法灵芝三菇化合物，文献报道大多是经过反复硅胶柱层析分离，较纯的部分再用薄层层析、低压柱层析、制备高效液相色谱等进行分离纯化［6］。3.2.1吸附色谱法硅胶柱色谱法是比较常用的三砧类化合物分离纯化方法，各种方法中洗脱

6、液互有差异。黄伟光［7］等用氯仿-甲醇脱洗，配比为98:2,获得无定形苦味灵芝酸A；用95:5配比获得无定形微苦灵芝酸B。3.2.2高效液相色谱法（HPLC）HPLC检测三帖类化合物，具有快速、简便、灵敏的特点，已经得到广泛应用。邢增涛等用HPLC对同一灵芝株不同生长阶段及不同品种灵芝子进行研究，证实HPLC分离三菇类物质的良好表现［8］。3.2.3大孔吸附树脂大孔吸附树脂是新型的一项技术。大孔树脂通过表面吸附、表面电性或形成氢键等达到目的［9,10］。具冇有机溶剂少，选择性好，吸附容量人，再生处

7、理方便等优点。木文采用此纯化方法。4试药与仪器4.1试线。灵芝药材（国琼紫灵芝）；D101大孔树脂（上海开平树脂有限公司）；齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所）；硅胶G；以下试剂均为分析纯：乙醇、甲醇、氯仿、石油瞇、甲酸乙酯、甲酸。4.2实验仪器。旋转蒸发仪（N-1000,日木）；GB204电子天平（瑞典）;751型紫外一可见分光光度计（上海分析仪器厂）；树脂柱（杭州三特医药化工设备有限公司）等。5方法与结果5.1灵芝三菇的提取。灵芝子实体，切片后烘燥、打粉。每次称取300克灵芝子实体粗粉置于

8、2500ml的圆底烧瓶中，以95%乙醇作为提取溶剂，料液比为1:5、浸提温度为80度左右、浸提时间为1.5h,回流提取3次,待冷却后过滤，合并滤液，减压浓缩，可得浓缩液。5.2灵芝三菇的纯化。将新大孔树脂于95%乙醇溶液中浸洗24h后，用蒸憾水清洗至无醇味，再用5%盐酸浸泡24h,用蒸憾水洗至pll值中性后，接着用5%氢氧化钠浸泡24h,再用蒸饰水洗至pH中性，用蒸锚水浸泡备用。取预处理后的D-101人孔树脂各5g,置磨口锥形瓶中，加入三砧提取粗液10mL,于80°C下恒温水浴振荡