直接抗人球蛋白IgG检查标准操作程序

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1、直接抗人球蛋白IgG检查标准操作程序1.试验原理和目的将抗球蛋白血清加入已经致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白与抗球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，通过桥梁作用使红细胞发生凝聚。通过直接抗人球蛋白试验可检查红细胞是否被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病（胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏）、溶血性输血反应（输入的不相合红细胞被受者不完全抗体致敏）、自身免疫性溶血性贫血（患者红细胞被自身抗体致敏）以及药物诱导产生的自身抗体（由甲基多巴类药物、青霉素等所致）。2.标本要求2.1病人准备标本采集前患者处于安静状态，避免剧烈运

2、动、情绪激动。2.2标本要求2.2.1标本种类EDTA抗凝管2.2.2标本容器01开头的紫色短管（EDTA1:9抗凝）2.2.3标本存放采完标本立即送检，标本禁忌放入4°C〜8°C冰箱中。已检标本封盖后室温放置，保存48小时后由医院按感染标本统一处理。2.2.3标本拒收样品标识不清或标识错误、采血管不正确、严重溶血或脂血、与申请单内容不符等标本。3.试剂3.1试剂成分：直接抗人球蛋白试剂盒（上海血液生物医药有限公司人抗TgG,C3d（多特异性）、抗IgG、抗C3d；理盐水。3.2用不完全抗D致敏的5%Rh（D）阳性红细胞盐

3、水悬液供阳性对照用：収3人0型红细胞，混合，经盐水洗涤后取压积红细胞，加等量抗D血清，置于37°C水浴致敏lh,盐水洗涤3次，用盐水配成5%红细胞悬液。3.3正常人5%D阳性红细胞悬液（未致敏），供阴性对照用，除不用抗D血清致敏外，按上述方法配制。3.4试剂贮藏要求：2〜8°C冰箱.4.仪器4.1口本OLYMPUSCX31普通光学显微镜。4.2SSW型微电脑电热恒温水槽（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）5.操作步骤5.1取受检者红细胞，以生理盐水洗涤3次（3000rpmlmin）,末次洗涤后，将上层盐水倒尽，再以滤纸将管口

4、附着的盐水吸去，配成5%红细胞盐水悬液。5.2取上述5%受检者红细胞盐水悬液1滴，滴入1小试管内，加抗球蛋白血清2滴，混匀。5.3阳性对照：不完全抗D致敏的5%Rh（D）阳性红细胞盐水悬液1滴，滴入1小试管内，加抗球蛋白血清2滴，混匀。5.4阴性对照：常人5%D阳性红细胞悬液（未致敏）1滴，滴入1小试管内，加抗球蛋白血清2滴,混匀。5.5受检管及阳性、阴性对照管同时以3000r/min离心15秒，轻轻混和，观察结果。4.检验结果报告6.1结果判定：须持一定角度轻轻地摇动试管直到松动所有的细胞，然后反复倾斜试管，直到均匀的细

5、胞悬液（阴性）或者凝集物邙口性）为止。如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检红细胞凝集者直接抗人球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。6.2报告传输及打印在LIS操作界而输入结果，审核发送报告，门诊和病房报告单在指定处打印。7.参考范围正常人：阴性。8.安全防范操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当屮暴露A长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒屮。9.注意事项9.1

6、标本采集后应立即进行试验，延迟试验或屮途停止可使抗体从细胞上丢失。9.2抗球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，否则，可产生前带或后带反应而误为阴性结果。9.3最好对阴性结果进行核实，即在该试管屮再加1滴IgG致敏红细胞，如结果为阳性，则表示试管内的抗球蛋白血清确末被消耗。9.4红细胞上吸附抗体太少或Coombs阴性自身免疫性溶血性贫血，直接抗球蛋白试验可呈假阴性反应。9.5全凝集或冷凝集血液标本中含有Wharton胶且洗涤不充分，血液标本中有很多网织红细胞且抗球蛋白血清屮含有抗运铁蛋白时，都可使红细胞产生凝集。9.6试剂储

7、存于2-8°C,保存至有效期。勿长时间存放在高温条件下或反复冻融。10•临床意义10.1温抗体型导致的ATHA,DAT强阳性。10.2药物诱发的1山，Q—甲基多巴、青霉素DAT阳性,奎宁型多为IgM阳性10.3冷凝集综合症：用抗人全血清的抗人球蛋白血清与在37°C洗涤过的患者红细胞作试验，DAT阳性。10.4PNH患者在溶血发作时，DAT强阳性，发作后期转阴。10.5新生儿同种免疫溶血病：因RH抗体引起溶血的病例，全抗或单抗IgG的DAT强阳性，AB0则多为阴性或弱阳性。10.6结缔组织病，淋巴细胞增殖疾患，癌肿，EVAN

8、综合症等，DATnf呈阳性。11・参考文献11.1《全国临床检验操作规程》（第4版）11.2抗人球蛋白试剂盒使用说明书。