抗人球蛋白试验.ppt

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抗人球蛋白试验马强虎 1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs）等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验，即抗人球蛋白试验。别名：Coombs‘试验(库姆斯试验)。Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞凝集。 抗人球法是检测不完全抗体的经典方法，分为直接试验(直接反应)和间接试验(间接反应)。直接Coombs试验：是检查被检红细胞上有无不完全抗体。间接Coombs试验：是检查血清中游离的不完全抗体。 直接抗人球蛋白试验直接抗人球蛋白试验原理：患者体内若有与红细胞抗原不相合的不完全抗体存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物。但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接抗原抗体复合物，仅使红细胞处于致敏状态。加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸咐的不完全抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼可见的凝集。这种直接检测体内被抗体或（和）补体致敏红细胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。 直接抗人球蛋白试验直接抗人球蛋白试验操作：（65%凝胶，35%抗人球蛋白试剂）1.撕开检测卡的封膜于反应腔中加入待检1%RBC生理盐水悬液50ul；2.将检测卡于离心机1800r/min1min,2500r/min1min离心；3.取出，结果判读； 结果判读 直接Coombs试验抗人球蛋白自身抗体致敏RBC可见凝集 4.结果解释阳性：待检标本RBC已致敏IgG不完全抗体或补体；阴性：待检标本RBC未致敏不完全IgG抗体。 间接抗人球蛋白试验间接抗人球蛋白试验原理：用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不完全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上相应的抗原。在37℃条件下，若被检血清或红细胞有对应的不完全抗体或抗原，则抗原抗体作用使红细胞致敏再加抗人球蛋白试剂，与红细胞上不完全抗体结合，出现肉眼可见凝集。这种通过体外将红细胞致敏后，再检测红细胞有无不完全抗体或抗原的试验称为间接抗人球蛋白试验。 间接抗人球蛋白试验间接抗人球蛋白试验操作：（65%凝胶，35%抗人球蛋白试剂）1.撕开检测卡的封膜于反应腔中依标记分别加入相应的0.5%筛选细胞LIM悬液100ul，各管再加入待检血浆或血清25ul；2.将检测卡37℃孵育≧10min，取出，置离心机1800r/min1min,2500r/min1min离心；3.取出，结果判读；（方法同上） 间接Coombs试验抗人免疫球蛋白同种异型抗体 4.结果解释阳性：待检血浆或血清中含有不完全抗体IgG或完全抗体IgM；阴性：待检血浆或血清中不含不完全抗体IgG或完全抗体IgM； 抗人球蛋白试验意义1.本试验是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重要依据，特别是IgG型引起的溶血性贫血，直接反应常呈强阳性，间接反应大多阴性，但亦可阳性。（血肾科有一病例）2.新生儿同种免疫溶血病：因Rh血型不合所致溶血病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合引起的溶血病，直接常为阴性或弱阳性，间接反应为阳性. 3.药物诱发的免疫性溶血性贫血①α-甲基多巴型：直接及间接反应均阳性。②青霉素型：直接反应阳性，间接反应阴性③福阿亭型：（奎宁等药物）抗体通常为IgM，偶有IgG型者，直接反应为阳性，间接反应阴性4.冷凝集素综合征：直接反应阳性，间接反应阴性（37℃）。由于本病红细胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗IgG或抗IgM抗血清做试验时则结果阴性，如以抗补体的抗血清做试验则直接反应阳性。 5.红细胞血型不合引起的输血反应6.ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏以前，直接反应阳性7.Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾没有妊娠Rh阳性胎儿者，间接反应阳性，第一次输血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变为阳性 8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等，病人直接反应亦可阳性9.阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性发作后用抗补体血清做试验直接反应常为阳性。 我们科室Coombs试验已开展，报告方法：1、接收标本；2、完成试验；3、免疫组中免疫手工中报告结果。 谢谢