(精选)微生物限度检查法质控要点

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1、微牛•物限度检查法质控耍点蒋煜国明（山东省药检所）郑力真（山东省药检所）摘要：本文结合省约检所的检验实际，对微生物限度检查法的主要质控要点和申请人在研究过程中容易出现的问题进行了初步梳理，以期引起屮请人对该部分研究内容的关注，并不断提高研究质量和申报质最。关键词：微生物限度检查法质控质量标准一、概述微生物限度检查是检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染的方法。中国药典2005年版在2000年版基础之上，要求对微牛物限度检查进行方法验证。微生物限度检查法验证工作实际上是一个系统性工作，涉及到细菌选择、供试液处理，考察供试品以及试验方法、试验环境等对微生物的影响情况多方面内

2、容。木文结合在山东药检所的学习和交流，初步梳理了微生物限度检查方法的质控要点。另外由于中国药典2005年版执行时间较短，中请人对该检查项方法验证工作不熟悉，也使部分申报资料以及产品质量标准出现了各种问题。本文拟初步就微生物限度检查方法的质控要点以及申请人所出现的常见问题进行分析，以希申请人能提髙该项检查的研究质量。二、质控要点与研发中容易出现的问题（一）试验木身1＞验证试验的完整性微生物限度检杳法验证的质最与验证试验的完整性，以及验证方法的科学性密切相关。验证工作不完整，遗漏或缺省了部分验证工作，不能完全体现供试品和试验过程对微生物的影响情况，很可能影响或干扰了对最终试验结果

3、的判断。以下是该部分试验设计或操作中的一些需要重点关注的地方，也是约检所审核过程中发现申请人授容易出现问题的部分：（1）中国药典2005年版要求对•于细菌、霉菌和酵母菌的计数方法的验证，应该采用5种试验菌，即人肠埃希菌、金黄色匍萄球菌、枯草芽胞杆菌、H色念珠菌和黑曲霉菌。有些申请人只对部分试验菌进行方法验证，特别是容易忽视对黑曲需菌的验证。小国药典2005年版根据不同制剂的给药途径，要求对不同的控制菌进行检查，并在屮国药典2000年版基础上，增加了大肠菌群检查法和梭菌检查法。部分申请人未注意到该变动内容，从而少做或漏做了上述内容。（2）某些供试品含有抗微生物物质，需要采取适当

4、方法消除或抑制供试品中抗微生物物质的活性。因此在对供试液进行特殊处理时，既耍考察供试品的抑菌活性，述耍考察在供试液制备过程中微生物受影响的程度，即按照屮国药典附录小的要求采用稀释剂对照组的方法进行判断。部分申请人对供试液采取了消除抑菌作用的特殊处理方法，但未用稀释剂对照组进行对照，或者简略了部分操作步骤。（3）计数验证应进行3次独立平行试验，要求分别取样3次，尤其是菌液组也应独立进行3次平行试验。在3次平行试验基础上应分别计算每次试验菌的回收率，分別对每次试验结果进行判断。而不是计算平均值后进行判断。在复核过程中，发现部分申请人未完全理解进行独立平行试验的意义，仅提供了一次试

5、验的数据,或者将同一供试品溶液同时分别作三份平行，作为三次试验，对于菌液纟fl也仅提供了一次试验的数据，无法保证验证试验的完整性，无法判断试验结果。2、验证试验的科学性（1）菌种选择：屮国药典要求所有试验菌不应该不超过5代。另外应该根据不同剂型或者制剂的不同给药途径选择控制菌。个别中报资料忽视了上述要求，选择的控制菌不符合耍求。对于某些含动物组织（包括提取物）的制剂，新版药典要求对沙门菌进行检杳，但是对于某些非动物组织，但是由动物來源的药物，如某由马尿中捉取的约物，是否检查沙门菌，约典没冇明确规定。但是考虑到其来源，收集和保存过程的污染可能性，认为述是应该对沙门菌进行检查。由

6、于胶囊壳的主要成分明胶来源为动物皮或者骨，也应该对胶囊壳或胶囊进行沙门菌检验。（2）供试液的制备：中国药典2005年版要求根据供试品的理化和生物学性质，选择供试液的制备方法。另外，在检查沙门菌时，中国药典2005年版要求供试液的检验量为10g或者10ml,中国费典2000年版的检验量为1g和1ml,两版药典的检查限度不变，比较而言両者提高了质量要求。部分申请人在试验过程屮未注意到上述变化，仍采用原检验最进行考察。（3）进行细菌计数方法验证时，大部分抗生素类药物试验组应将供试液过滤，冲洗，以去除抑菌作用，并在最后一•次冲洗液小加入试验菌，过滤。但有申请人在制备试验组供试液时，在

7、冲洗前就加入试验菌，或者是过滤后再加入试验菌。建立稀释剂对照组目的是考察供试液制备过程对微*物的影响，而不仅仅是考察稀释剂对微牛物的影响。所以在进行稀释剂对照组的试验时，冇的申请人采用稀释剂加菌液注血培养的方法是不妥当的。疋确的方法是与供试液的处理方法一致，如薄膜过滤法计数，应采用相应稀释液替代供试品,加入试验菌，按照试验组的供试液制备方法，薄膜过滤、冲洗，培养。而不是过滤稀释液后再在最后一次冲洗时加入试验菌。这时，需注意稀释剂对照组加入试验菌的步骤与试验组冇所不同，另外述需要注意保持冲洗量和冲洗方法与