微生物限度检查法2

《微生物限度检查法2》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、微生物限度检查法2007-9-19来源：中国兽药114网编辑：信风浏览:102  本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。供试用家兔供试用的家兔应健康无伤，体重1.7～3.0kg，雌兔应无孕。预测体温前7日即应用同一饲料饲养,在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。未经使用于热原检查的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔；或供试品判定为不符合规定,但其组内家兔平均升温未达0.8℃，且已休息两周以上的家兔；或

2、三周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前3～7日内预测体温，进行挑选。挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔1小时测量体温1次，共测4次，4次体温均在38.0～39.6℃的范围内,且最高最低体温的差数不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息2日方可供第2次检查用。如供试品判定为不符合规定,且其组内家兔平均升温达0.8℃或更高时，则组内全部家兔不再使用。每一家兔的使用次数，用于一般药品的检查，不应超过10次。试验前的准备在作热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能

3、处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于5℃，实验室的温度应在17～28℃,在试验全部过程中，应注意室温变化不得大于3℃，应避免噪音干扰。家兔在试验前至少1小时开始停止给食并置于适宜的装置中,直至试验完毕。家兔体温应使用精密度为±0.1℃的肛温计，或其他同样精确的测温装置。肛温计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm，时间不得少于1分半钟，每隔30～60分钟测量体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃,以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。当日使用的家兔，正常体温应在38.0～39.6℃的范

4、围内，且各兔间正常体温之差不得超过1℃。试验用的注射器、针头及一切和供试品溶液接触的器皿,应置烘箱中用250℃加热30分钟或用180℃加热2小时，也可用其他适宜的方法除去热原。检查法取适用的家兔3只,测定其正常体温后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至约38℃的供试品溶液，然后每隔1小时按前法测量其体温1次,共测3次,以3次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高度数。如3只家兔中有1只体温升高0.6℃或0.6℃以上,或3只家兔体温升高均低于0.6℃,但升高的总数达1.4℃或1.4℃以上，应另取5只家兔复试，检

5、查方法同上。结果判断在初试3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总数低于1.4℃；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的兔数仅有1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总数为3.5℃或3.5℃以下,均认为供试品的热原检查符合规定。在初试3只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的兔数超过1只；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的兔数超过1只；或在初试、复试合并8只家兔的体温升高总数超过3.5℃，均认为供试品的热原检查不符合规定。微生物限度检查法微生物限度检查法系指非规定灭菌制

6、剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法。包括染菌量及控制菌的检查。供试品应随机抽样。如遇有异常或可疑的样品，须选取有疑义的样品。一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。供试品在检验前不得开启，在检查前及检查中应防止供试品污染菌受损、致死或繁殖。凡能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出发霉、变质的药品，可直接判为不合格，无需再抽样检查。检查的全部过程均应严格遵守无菌操作，严防再污染。除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25℃～28℃，控制菌培养温度为36±1℃。细菌

7、、霉菌（酵母菌）计数和控制菌检查，均应作对照试验。检验结果的报告以1g、1ml或10cm<2>为单位。培养基及其制备方法：1、营养琼脂培养基与营养肉汤培养基见无菌检查法（附录ⅩⅢＢ）2、虎红琼脂培养基胨5g虎红（四氯四碘荧光素）0.0133g葡萄糖10g（或0.133％虎红溶液10ml）磷酸二氢钾(KH2PO4)1g琼脂15～20g硫酸镁(MgSO4.7H2O)0.5g水1000ml除葡萄糖、虎红外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、虎红，分装，115℃灭菌30分钟。3、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)胨10

8、g琼脂15～20g酵母浸出粉5g水1000ml葡萄糖20g除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热融化后，滤过，加入葡萄糖，分装，115℃灭菌15分钟。4、胆盐乳糖培养基(BL)胨20g牛胆盐1.3g乳糖5g（或去氧胆酸钠0.25g）氯化钠5g水100ml磷酸氢二钾(