碱性磷酸酶检测

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1、1血清碱性磷酸酶活性测定（磷酸苯二钠法）2实验目的熟悉酶活性检测的意义熟悉血清ALP活性测定方法(磷酸苯二钠法)掌握血清ALP活性测定的临床意义3实验原理酶活性：酶催化某一化学反应的能力，常用单位时间内产物的生成量(即酶促反应速度)来表示酶活性大小。终止测定法(或定时法):在酶作用一段时间后，加入强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止酶促反应，测定这段时间内产物的生成量，计算酶促反应的平均速度，得到酶活性值。连续监测法:每隔一定时间(2-60s)，连续测定产物量随时间变化的情况，求出酶反应初速度，间接得到酶活性值。该方法适用于自动生化分析仪，成为临床测定酶活性浓

2、度最常用的方法。4酶活性检测的影响因素合适的底物与最适底物浓度，[S]>>[E总]理想的缓冲液与最适离子强度合适的辅因子、激活剂浓度合理的测定时间(?)最适温度(?)最适pH(?)56碱性磷酸酶ALP(Alkalinephosphatase)ALP几乎存在于机体各个组织，以骨骼、牙齿、肝脏和肾脏中含量较多，儿童的ALP活性高于成人。临床测定ALP活性主要用于肝脏疾病和骨骼疾病诊断.生理性增加:儿童、孕妇及进食高脂食物可使血清ALP活性增高.病理性增加:(1)肝胆疾病。阻塞性黄疸、黄疸性肝炎和肝癌等，尤以癌性梗阻最明显。(2)各种骨骼疾病。佝偻病、纤维性

3、骨病、成骨不全症、骨转移癌和骨折修复愈合期等。病理性降低:呆小症、磷酸酶过少症等。7磷酸苯二钠法在pH=10条件下，ALP可催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠。苯酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化生成醌衍生物，根据红色深浅可测定酶活性的大小。K3Fe(CN)6金氏单位(King’sunit):在37℃条件下，每100mL血清与底物作用15分钟，产生1mg酚的ALP活性为1个金氏单位。8实验步骤TSBC血清(mL)0.1———酚标准液(mL)—0.1——蒸馏水(mL)——0.1—碳酸盐缓冲液(mL)1.01.01.01.0混匀,37

4、℃水浴保温5分钟，同时将底物液预热底物液(mL)1.01.01.01.0混匀,37℃水浴准确保温15分钟铁氰化钾溶液(mL)3.03.03.03.0血清(mL)———0.1立即混匀，以蒸馏水调零点，在510nm处读取各管吸光度。参考值:成人为3-13个金氏单位，儿童为5-28个金氏单位计算:9讨论1.分析各个试管的功用？2.分析公式中各个数值的意义？3.讨论实验操作中两个时间的意义以及精确性。