生化制品技术实验指导

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1、《生化制品技术》实验大纲一、实验目的本实验是《生化制品技术》课程的配套实验，目的是增加学生对生物药物及生物技术制药的感性认识及提高学生的实验操作能力。要求学生熟悉并掌握生物药物的制备过程和生物技术制药的基本操作方法。二.适用专业及层次适用于生物制药技术专业学生三.实验内容和学时分配序号实验内容学时实验类型必做/选做备注1牛奶中酪蛋百和乳蛋白素粗品的制备4操作实验必做2卵磷脂的制备及鉴定4操作实验必做3薄层板制备及使用4操作实验必做4甘露醇的制备及鉴定4操作实验必做5甲壳素制备4操作实验必做合计20实验一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备一、实验目

2、的1•掌握盐析法的原理和操作。2.掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。二、实验原理乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白(caseins),酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。利用此一性质，可先将pH降至4.8,或是在加热至4(TC的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液出去。在经过一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素。三、实验器材烧杯

3、(250ml和100mlX玻璃试管(10mmx100mmX离心管(50ml)、磁力搅拌器、PH计、离心机、水浴锅。四、试剂和材料脱脂牛乳或低脂牛乳、无水硫酸钠、0.lmol/LHCL.0.lmol/LNaOH、滤纸、pH试纸、浓盐酸、乙酸缓冲溶液0.2mol/L(pH4.6)、乙醇。五、操作步骤1.盐析或等电点沉淀制备酪蛋白(1)将50ml牛乳倒入250ml烧杯中，于4(TC水浴中加热并搅拌。(2)向上述烧杯中缓缓加入(约lOmin内分次加入)10g无水硫酸钠，再继续搅拌lOmin(或加热到40°C,再在搅拌下慢慢地加入50ml40°C左右的乙

4、酸缓冲液，直到pll达到4.8左右，将悬浮液冷却至室温，放置5min).(3)将溶液用细布过滤，分别收集沉淀和滤液。沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中，过滤出去乙醇溶液，抽干。将沉淀从布氏漏斗中移出，在表面皿上摊开以除去乙醇，干燥后得到的是酪蛋白。准确称重。2.等电点沉淀法制备乳蛋白素(1)将制备酪蛋白操作步骤(3)所得滤液置于lOOiiil烧杯中，一边搅拌，一边利用pH计以浓盐酸调整pH至3±0・1。(2)将溶液倒入离心管中，6000r/min离心15min,倒掉上层液。(3)在离心管内加入10ml去离子水，振荡，使管内下层物重新悬浮，

5、并以0.lmol/L氢氧化钠溶液调整pH至8.5-9.0(以pH试纸或pH计判定),此时大部分蛋白质均会溶解。(4)将上述溶液以6000r/min离心lOmin,上层液倒入50ml烧杯中。(5)将烧杯置于磁搅拌加热板上，一边搅拌，一边利用pH计以0.lmlo/L盐酸调整pH至3±0.1。(6)将上述溶液以6000r/min离心lOmin,倒掉上层液。取出沉淀干燥，并称重。六、结果与讨论1•计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量，并与理论产量(3・5g)相比较。求出实际获得率(％)。2•计算出100ml牛乳所制备出的乳蛋白素数量。实验二卵磷脂

6、的制备及鉴定一、实验目的学习从蛋黄中制备卵磷脂的方法和基本操作。二、实验原理利用卵磷脂可溶于乙醇的性质，将卵黄溶于乙醇，卵磷脂从卵黄中转移到乙醇溶液中，可分离提取出来，而蛋白质等某些杂质从沉淀物中除去。但由于乙醇溶剂抽提时，其他物质也一起被抽提，如甘油三脂、辎醇等。利用卵磷脂不溶于丙酮的性质，用丙酮从粗卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂与其他脂质和胆固醇分离开来。无机盐和卵磷脂可生产络合物沉淀，因此可利用金属盐沉淀剂将卵磷脂从溶液中分离出来，由此除去蛋白质、脂肪等杂质，再用适当溶剂萃取出无机盐和其他磷脂杂质，这样可大大提高卵磷脂纯度。三、实验器材

7、离心机、旋转蒸发仪、布式漏斗、抽滤瓶、真空干燥箱、层析缸、紫外分光光度计。四、试剂和材料95%乙醇、丙酮、10%ZnC12、2%氯仿、碘、甲醇、0.1%乙醇、无水乙醇。五、操作步骤1、粗提室温下，取适量的鸡蛋卵黄用2倍于卵黄体积的95%乙醇进行提取，混合搅拌，离心分离(3000r/min,5min),将沉淀物重复提取3次，回收上清夜；然后减压蒸馆(45°C)至近干，用少量石油瞇洗下粘壁的黄色油状物质；加入丙酮，抽滤，分离出沉淀物,真空干燥(4(TC,30min),得到淡黄色的粗卵磷脂，称重。2、精制取一定量的卵磷脂粗品，用无水乙醇溶解，得到约1

8、0%的乙醇粗提液，加入相当于卵磷脂质量的10%的ZnCl2水溶液，室温搅拌0.5h;分离沉淀物，加入适量冰丙酮(4C)洗涤，搅拌lh,再用丙酮反复研洗