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1、实验名称实验二芸香苜的提取、精制、水解和鉴定实验班级08药本1、2班实验课吋间2010.5.11>14、18、21课时数10分组12实验目的：1.学握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。2.掌握黄酮苜的水解方法。3.掌握黄酮甘的鉴定方法。实验原理：1.芸香甘分子中具有酚疑基，显弱酸性，在碱水中成盐增大溶解能力，用碱水为溶剂煮沸提取，提取液加酸酸化后乂成为游离的芸香甘而析出。并利用芸香甘对冷水和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。2.黄酮甘可通过酸水解得到甘元和糖，并可通过薄层色谱法进行检识。0HOW0HO-GIc-RhaOHORutinose注：芸香甘(芦丁，rutin)：C27H:i
2、0016-3H20,淡黄色针状结晶，mpl74°C〜178°C,无水物为188°C〜190°C。溶解度：冷水中1:8000,热水中1:200,冷乙醇中1:300,热乙醇中1:30,冷毗喘中1:12,微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、氯仿、石油醸等溶剂。桝皮素(quercetin)：C^HwO；•2H20,黄色结品，mp313°C〜314°C,无水物为316°Co溶解度：冷乙醇中1:20,沸乙醇中1:23,可溶于甲醇、乙酸乙酯、毗陀、丙酮等溶剂，不溶于水、乙瞇、苯、氯仿、石油瞇。实验试药与器材：试约：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸憾水、浓盐酸、2%硫酸、乙醇、1%氢氧化钠溶液、1%盐
3、酸溶液、10%酚溶液、浓硫酸、镁粉、1%醋酸镁卬醇溶液、正丁醇、醋酸器材：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、烧杯、层析筒、试管实验内容与方法：一、芸香甘的提取取槐花米20g（研碎），置于1000ml圆底烧瓶屮，加0.4%硼砂水溶液200ml,在搅拌下加右灰乳调PH8,加热微沸30分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花过滤,药渣同上重复一次。合并滤液用6N盐酸调PH2〜3,放置冰箱中析晶（一夜以上），待全部结晶析岀，抽滤，得粗芸香甘（滤饼用水洗3〜4次），放置空气屮自然干燥得粗品，称重、计算捉取率。二、芸香甘的精制取2g加蒸馄水400ml,加热煮沸溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜，析品，抽滤，
4、得精制芸香试。烘干。三、芸香苜的水解取精制芸香貳lg,置250ml圆底烧瓶中,加2%H2SO4溶液80ml,加热冋流30分钟至1小时，开始加热10分钟为澄清液，逐渐析岀黄色小针状结晶，即为楣皮素。放冷抽滤得结品，滤液保留作为糖的检查，沉淀物用蒸傭水洗至屮性，抽干水份，晾干称重，得粗制懈皮素。必要时可用稀乙醇重结晶。四、芸香琶的检识反应1.成盐反应取芸香试10mg左右，置试管中加蒸憾水2ml,振摇，观察试管有无变化，滴加1%氢氧化钠溶液数滴，振摇使芸香试全部溶解成为黄色澄明溶液，然后再滴加1%盐酸溶液数滴至成酸性反应，溶液则由澄明转为混浊状态（若当时不岀现混浊时可放置片刻或放置冰箱中冷冻一
5、定时间后再观察）。2.呈色反应取芸香苴•和桝皮素约10mg,各用5ml乙醇溶解，制成样品溶液，按下列方法进行试验，比较甘元和甘的反应情况。（1）Molish反应取样品溶液lml,加10%a-蔡酚乙醇溶液1ml,振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置，观察并记录液面交界处颜色变化。（2）盐酸镁粉反应芸香试与懈皮素溶液分别置于试管中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2〜3滴，观察并记录颜色变化。（3）醋酸镁纸片反应取两张滤纸条，分別滴两滴芸香背、榊皮素的乙醇溶液，然后各加1%醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外灯下观察荧光变化，记录现彖。五、芸香甘及蒯皮素的纸层析鉴定层析材料：层析滤纸点样:（1）提
6、取的芸香昔乙醇溶液（2）提取的蒯皮素乙醇溶液展开剂：正丁醇：醋酸：水（4：1：5）上层溶液显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫外灯下观察斑点颜色（2）喷洒1%三氯化铝乙醇试剂后再观察斑点的变化实验注意事项：1.提取过程中，加入硼砂的目的是为了保护芸香甘分了中邻二酚轻基，以减少其氧化，并使其不与钙离子结合（钙盐络合物不溶于水），使芸香甘不受损失，提高产率。2.实验屮应严格控制碱提取、酸沉淀的PH值。加入石灰乳即可以达到碱性溶解捉取的目的，述可以除去槐花米屮的多糖类、粘液质等，但碱性不宜过高（PH不超过10）,因为在强碱性条件下煮沸，时间稍长就可促使芸香甘水解破坏，降低产率；酸化时
7、PH不可过低，否则会使芸香甘形成样盐而降低产率。3.水解时应随时加水，避免蒸干。思考题：1.苜类水解冇几种催化方法？2.甘类水解的难易程度受到哪些因素的影响？
