免疫血清的制备与鉴定

《免疫血清的制备与鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、免疫血清的制备与鉴定（PreparationandIdentificationofAntiserum）%1.原理免疫血淸或称抗血淸，为含有某种抗原特异性的抗体分子的动物血淸，一般是从通过人工注射某种抗原的免疫动物制备的。优质的高效价抗血清可用于教学、科研以及疾病的诊断和治疗。某种物质进入体内后能否引起被免疫的动物产生抗体生成反应，一方面取决于抗原分子表面有无特杲性的抗原决定簇（AntigenicDeterminant）或称表位（Epilope）；另一方而取决于被免疫动物的机体的免疫状态。当具备上述吗个条件时，如果抗原剂量合适，免疫接种的途

2、径恰当,被免疫的动物就将遵循抗体生成的一般规律——初次反应和再次反应，产生抗体并获得免疫血清。制备免疫血清除需要纯化抗原外、还需要选择合适的动物及恰当的注射途径，优质的高效价免疫血清还与注射的抗原剂量，接种的次数等有着密切的关系。%1.抗原为了制备特异性强，效价高，亲和力好的优质免疫血清。首先必须要有合适的抗原。免疫血清的特异性除了与抗原的分子量大小有关外，还与抗原分子表面抗原决定簇的性质、空间位置、立体构象以及种属差异等密切相关。抗原的种类繁多，依其来源的不同可以分为天然抗原、人工抗原、合成抗原，重组抗原等。天然抗原乂可分为可溶性抗原（

3、如血清、毒索，组织浸出液，组织或细胞蛋白质等）、颗粒性抗原（如细菌、病毒、细胞等）、半抗原（本身无免疫原性，必须与载体蛋白结合后才有免疫原性，如青霉素、氯鑫素、雌激素、胰岛素等）、合成性抗原（如多肽等）以及基因工程抗原等。%1.动物的选择家兔、羊、马、驴、大鼠、小鼠、豚鼠、鸡、猴等都是常用的免疫动物，在实验中，选择动物时应考虑抗原与动物的种属关系、抗原性质与动物种类、免疫血清需要虽、免疫血清要求以及动物个体和用途等因素。实验用免疫血清多选用家兔、大鼠、小鼠、豚鼠和鸡，商业用牛产多用马、羊、驴，特殊情况选用猴。此外，免疫用动物述应选适龄、健

4、壮.最好为雄性。实验用免疫血清最常用的动物是家兔，一般选择选择当年繁殖的，体重2〜3公斤，年龄在6个月以上的雄性，健康家兔，免疫前用金属编号牌固定兔耳，或用染料涂沐在动物的背部，做出明饰的标记。免疫前，还应采血测定动物体内有无低滴度交叉反应性天然抗体的存在。%1.免疫途径，免疫剂量和免疫周期不同的免疫途径，抗原在体内的的代谢速度不同，对免疫系统的刺激强弱也就不同，因而,产生抗体的水平也就不同。抗原的注射途径可根据免疫动物个体的人小、抗原及抗体制备目的或要求的不同，选用皮内、皮下、肌肉、静脉、淋巴结内或腹腔等不同途径注入抗原进行免疫。一般家

5、兔常采用背部、足掌、淋巴结周围、耳后筹处皮内或皮下多点注射，皮内和肌肉途径较少采用。免疫原的注射剂量随抗原的性质有较人差异。一般应考虑抗原的免疫原性的强弱、分子量人小、抗原的纯度、毒性的有无以及动物个体的状态、免疫途径和免疫时间，佐剂的使用与否等。对于纯的町溶性抗原，免疫时一•般需要与等量的弗氏完全佐剂（Freund'sCompleteAdjuvant）混合，其免疫剂量通常小甌首次抗原剂量为50〜100吒/次，大僦为100〜200ug/次，兔为100ug〜1000ug/次，合成免疫原为2mg（半抗原约为20〜200ug）。加强免疫的剂量为

6、首次计量的1/2,可用不完全弗氏佐剂或不用佐剂。如需制备髙度特界性的抗血清，可选用低剂量抗原短程免疫法；反之，欲获得高效价的抗血淸，宜采用大剂量抗原长程免疫法。免疫周期一般随抗原和免疫方法的不同以及是否使用佐剂血变化。间隔时间可从数日到数周，一般无佐剂时间隔2-4天，加用佐剂时可间隔10-30天。初次免疫与第二次免疫的间隔时间多为2〜4周，此后，每次加强免疫的间隔时间为2-3周。%1.佐剂佐剂乂称免疫增强剂。它可以增强抗原的免疫原性以及改变机体的免疫反应性，达到增强免疫力或提高抗体产牛水平以及使抗原在体内维持时间明显延长等功效。佐剂的种类

7、很多，在免疫血淸的制备屮通常多用弗氏佐剂（Freund*sAdjuvant），也有学者译为福氏佐剂。弗氏佐剂分为屮;氏完全佐剂和JI：氏不完全佐剂（Freund'sIncompleteAdjuvant）o二者主要的差别在丁讪；氏完全佐剂禽有卡介苗。%1.免疫原的制备1.抗原稀释：免疫用的抗原一般应使用新配制的灭菌牛理盐水或PBS稀释，然后再与佐剂等量混合制成乳剂后用于动物免疫。2.抗原的乳化：乳化的方法有乳钵研磨法、注射器推注法，超声乳化法和机械搅拌法等多种。1）注射器推注法：是将抗原溶液和等量的完全佐剂（注意佐剂必须预先加热融化，但不超

8、过50°C）分别吸入两个5ml注射器内，在两个注射器的1才针头间用一根长约数厘米的医用无毒塑料管，将两个注射器连接在一起（塑料管必须先经酒精浸泡消毒，使用时収出，用灭菌生理盐水冲洗后，与注射器