免疫血清的制备.ppt

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1、免疫血清的制备目的要求熟悉免疫血清制备的过程了解动物实验的基本知识原理将抗原物质经适当途径，按照预先制定的免疫方案免疫动物，经过一定时间，可刺激机体产生特异抗体并释放入血液，当血中抗体达到一定效价时采血，分离血清，即为特异性免疫血清（又称为抗血清）。因抗原具有多种表位，可激活多个克隆的B细胞活化产生抗体，因此，这种免疫血清又称为多克隆抗体。本实验以绵羊红细胞（SRBC）作为免疫原，以家兔为免疫动物，制备兔抗养红细胞免疫血清（也称为溶血素）原理适当的途径、方法一定时间原理优质免疫血清的产生主要取决于：（一）、抗原的纯度和免疫原性（二）、动物应答的能力以

2、及免疫程序免疫程序影响因素：免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因素。适当的途径、方法一定时间材料1.动物健康成年家兔，雄性，体重2-3kg；健康成年绵羊。2.试剂生理盐水、碘酒、75%酒精。3.器材剪刀、镊子、无菌注射器、量筒、无菌毛细滴管、无菌试管、离心管、三角烧瓶（200ml）、动物固定架、手术器械一套、塑料放血管等。阿氏液（Alsever'sSolution）阿氏液是一种红细胞保存液，含有抗凝剂柠檬酸钠和细胞需要的养分葡萄糖。阿氏液配方如下：　　葡萄糖2.05克　　柠檬酸钠0.8克　　柠檬酸0.055克　　氯化钠0.42

3、克　　加蒸馏水至100毫升，加热溶解后将pH值调到6.1，高压灭菌，放置在4℃备用。方法兔抗羊红细胞免疫血清（溶血素）的制备1.抗原制备（1）用碘酒和75%消毒绵羊皮肤，抽取颈静脉血液，注入含有等量阿氏液的三角烧瓶内，混匀。阿氏液既有抗凝作用，又适于储存SRBC。分装后置4℃冰箱内，可使用3周。（2）无菌取上述绵羊血于离心管中，用无菌生理盐水洗涤红细胞，2000r/min，离心5min，吸弃上清液和白细胞层，再用无菌生理盐水与SRBC混匀，2000r/min，离心5min，重复3次。最后一次离心10min，以使血细胞沉积于管底，弃去上清液。（3）

4、根据红细胞积压，用生理盐水配成20%SRBC悬液。2.免疫动物（1）全班分为4组，每组选择健康雄性兔1只，用于免疫。（2）用全血和SRBC悬液按下述方案免疫兔子。免疫日期第1天第3天第5天第7天第12天第15天注射途径皮内皮内皮内皮内耳静脉耳静脉免疫原全血全血全血全血20%悬液20%悬液剂量(ml)0.51.02.01.01.02.0（3）试血末次注射后第7天，耳静脉采血1ml,分离血清，用试管凝集试验滴定效价。（1：2000以上可用）3、分离血清（1）颈动脉放血（心脏采血）并收集于无菌三角烧瓶中凝固后4℃冰箱过夜，分离上层血清。然后2500r/mi

5、n离心10min，收集收集上层血清。（2）收集的血清经鉴定纯化后，小量分装，-20℃冻存。