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1、农业微生物制剂的活性菌分离与鉴定学生姓名:学号:指导教师:所在学院:专业:屮国大庆2013年6月农业微生物制剂的活性菌分离与鉴定摘要：微生物制剂是以自然界中分离的有益菌为主体开发的产品，在健康、环保及农业生产上应用广泛。某农业微生物制剂在海南的热带农业生产中能显著增产和增强作物抗性，为了了解该微生物制剂的作用机制，本研究采用平板划线法对活性菌进行分离和纯化，对分离菌株进行生长、形态及显微观察，对16SrDNA进行序列PCR扩增、测序及生物信息学分析，鉴定活性菌的种属。结果表明，分离得到2个形态不同的细菌菌株，通过形态观察及16SrDNA序列的分子
2、鉴定，发现这2个菌株与枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)具有99.9%的同源性;2个菌株的16SrDNA序列的比较结果发现它们有7个碱基的差别，说明这2个菌株可能是不同的生理小种。关键词：农业微生物制剂;活性菌分离；16SrDNA；分子鉴定IsolationandidentificationofactivebacteriafromagriculturalmicrobialagentsAbstract：Microbialagentsareusefulproductsmadeofbeneficialbacteriathatisolate
3、dfromnatureenvironment,anditwasextensivelyappliedtohealthcare,environmentprotectionandagriculturalproduction・AmicrobialagenthassignificanteffectsonincreasingyieldandimprovingdiseaseresistanceforHainantropicalagriculture.Inordertodiscovertheactivitymechanismofthismicrobialagen
4、t,itwasnecessarytoisolateandidentifyitsactivebacteria.Inthisresearch,thefollowingmethodswereapplied,includingactivebacteriaisolatingandpurifying,growthobservation,morphologicalandmicroscopicobservation,PCRamplificationof16SrDNA,sequencingandbioinformaticanalysis.Theresultssho
5、wedthattwobacterialstrainswithdifferentmorphologicalcharacterwereisolated,16SrDNAsequenceswereamplifiedandsequenced,bioinformaticanalysisindicatedthat16SrDNAsequencesofthetwostrainshad99.9%identitieswiththatofBacillussubtilis.Moreover,the16SrDNAsequencesofthetwostrainswerecom
6、paredwitheachother,and7basedifferenceswerefound,itindicatedthatthetwostrainsweredifferentphysiologicalracesofBacillussubtilis.Keywords：agriculturalmicrobialagents;isolationofactivebacteria;16SrDNA;molecularidentification1—刖5随着科技进步，发展有机农业和生态农业是大势所趋［1-2］,农业微生物制剂在农业生产屮正发挥着越來越重要的
7、作用。农业微生物制剂通常含有单一或多种特定的功能菌株，能为植物提供有效养分或防治植物病虫害，并在保持土壤肥力、提高化肥利用率、促进作物生长、拮抗土传病害、维持生态系统平衡等方面起重要作用［3-4］o枯草芽砲杆菌（Bac订lussubt订is）是微生物制剂中的常用菌类Z-,为革兰氏阳性需氧菌，无荚膜，有鞭毛，能活动，芽抱位于菌体中央或稍偏，广泛分布在土壤及腐败的有机物屮。枯草芽砲杆菌在农业病害的生物防治上具有很大的潜力，菌体生长过程屮产生的枯草菌索、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，对儿十种真菌、细菌和病焉性病害有明显的抑制和杀灭作用，具有净
8、化土壤环境、保护作物根系、减轻土传病害的发生的作用［5-6］o枯草芽他杆菌对外界有害因子的抵抗力强、分布广、耐热性好，是理想的生防菌对象
