哈维氏弧菌ToxR部分基因序列克隆与分析【开题报告】

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1、毕业论文开题报告生物工程哈维氏弧菌ToxR部分基因序列克隆与分析⒈课题研究意义及国内外研究现状随着水产养殖业近年来的快速发展，海水养殖动物的细菌性病害造成了巨大的经济损失。由弧菌属细菌引起的弧菌病是在世界各地鱼、虾、贝类等海水养殖动物中普遍流行、危害最大的细菌性疾病之一。在已知的弧菌中，约20种是海水养殖动物的病原菌。哈维氏弧菌作为一种重要的海水养殖动物病原菌，其危害日益显现。ToxR基因是在环境中分布广泛的毒力基因的表达调控基因，能对多种环境毒力基因的表达进行调控，但在异种之间的toxR序列同源性较低，例如霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌间的toxR序列同源性为52

2、%-63%。这种特性使toxR基因成为弧菌科菌种鉴定的良好的靶标，toxR基因的PCR方法已经成功用于鉴定副溶血弧菌、霍乱弧菌和哈维氏弧菌等。国外对海水类弧菌病的研究始于20世纪初（Bergman，1909），自20世纪60年代后相继对多种弧菌属的致病菌有较丰富的研究和报道（Smith，1961；Horneetal，1977；Egidiusetal，1981；Liuetal，1997）。在PCR检测方面，Oakey等(2003)根据哈维氏弧菌以及其他弧菌的16SrDNA序列设计引物，用PCR方法检测哈维氏弧菌，阳性检出率为100%，但有时侯溶藻弧菌也呈交叉性阳性反应

3、，需要再借助其他的生化实验加以区分。与常规的血清学方法相比，单克隆抗体技术可以识别单一抗原决定簇，特异性强、亲和性一致，并且可以利用细胞系重复获得相同的抗原，是一种快速有效的检测方法，在病原的鉴定方面应用广泛。Chen等(1992)对哈维氏弧菌以及溶藻弧菌等10种弧菌的单克隆抗体检测技术进行研究，设计了3种单克隆抗体，可以进行哈维氏弧菌等弧菌的快速检测。⒉课题研究的主要内容、预期目标和研究方案主要内容：以检测toxR基因作为哈维氏弧菌水平上的特异性基因鉴定，根据toxR基因序列设计简并引物，扩增被检哈维氏弧菌所含的toxR部分基因，并对其进行序列分析。预期目标：分析

4、不同菌株间的toxR序列同源性，研究toxR基因在哈维氏弧菌中的作用和调控机制，以及有效应用于同源性较低的菌种间进行鉴定和区别。研究方案：试剂盒提取DNA设计引物并进行PCR产物进行测序与基因库中其他菌进行对比并建进化树作分析⒊课题进度计划2010年11月20日：指导老师分配任务2010年11月22日至2010年11月27日：收集实验相关资料2010年11月29日至2010年12月9日：实验准备，样品预处理2010年12月10日至2011年1月10日：完成实验及图片处理2011年3月14日至2011年4月22日：论文资料整理，论文撰写与修改⒋参考文献[1]MILLE

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