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《花鲈弧菌病病原菌_哈维氏弧菌_的分离与鉴定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第9卷第1期中国水产科学Vol.9No.12002年3月JournalofFisherySciencesofChinaMar.,2002花鲈弧菌病病原菌(哈维氏弧菌)的分离与鉴定*王保坤,余俊红,李筠,纪伟尚,徐怀恕(青岛海洋大学海洋生命学院,山东青岛266003)摘要B1999年4~5月,山东省青岛市胶南海区网箱养鱼场花鲈(Lateolabraxjaponicus)幼鱼发生暴发性传染病,死亡率达50%。从具有明显症状的病鱼的病灶组织分离到1株优势菌SF-1,经人工感染和从人工感染发病的花鲈再分离的SF-3菌株的再感染试验结果表明,所分离的菌株为此次花鲈烂尾病的致病菌。经形态、生理生化等64项
2、特征指标鉴定,SF-1和SF-3均为哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)。药敏试验结果表明,头孢噻肟、头孢三嗪、头孢孟多、呋喃妥因、氯霉素、氧哌嗪青霉素、磺胺类、复方磺胺、三甲氧苄氨嘧啶、多粘菌素E等10种药物对该菌株有明显的抑制作用。关键词B花鲈;哈维氏弧菌;药敏试验中图分类号BS943.211文献标识码BA文章编号:1005-8737(2002)01-0052-04弧菌病是危害海水养殖鱼类最严重的疾病之期间发病的花鲈幼苗。[1~4]一,可以感染多种鱼类并造成大量死亡。其1.2病原菌的分离中,哈维氏弧菌已逐渐成为水产动物,包括无脊椎动无菌操作挑取患病花鲈病灶部位,以平板稀释[5~8][9
3、]物(如虾)和脊椎动物(如鱼)养殖的一大杀手,涂布法进行细菌分离,培养基为2216E和TCBS。因而越来越引起水产养殖工作者的重视。1999年428e培养24h后,挑取优势菌落,在2216E平板上~5月,山东省青岛市胶南小口子网箱养鱼场养殖划线纯化。将纯化后的菌株置于15%甘油中,并保的花鲈(Lateolabraxjaponicus)幼鱼发生大量死亡,存于-80e冷冻箱中备用。病鱼的主要症状为体表发白、游动迟缓、厌食、尾部1.3感染试验严重溃烂(有的尾鳍已完全烂掉)。从具有明显发病试验用花鲈为海捕健康幼鱼,体重15~20g,体症状的病花鲈的尾、肠、鳃等病灶部位分离到1株优长10~15cm。将幼
4、鱼在3m@3m@1.5m的水泥势菌SF-1,经人工感染试验再分离到1株优势菌池中暂养7d后,分组饲养在50L的试验桶中(盛SF-3。本文对这2株菌的致病性、形态、生理生化特40L沙滤海水),每组25尾,设2个平行组。将待征及药物敏感性进行研究,旨为有效防治弧菌病的检菌株斜面培养24h后,用无菌生理盐水(0.85%暴发提供基础资料。NaCl)洗下,制成菌悬液,肌肉注射,注射菌液浓度4567为5.0@10、5.0@10、5.0@10、5.0@10、5.0@1材料与方法810cfu/ml,每尾注射0.1ml,对照组注射等量的无1.1病鱼菌生理盐水。每天正常投喂鱼粉,日换水量为水体取自山东青岛胶南小口
5、子网箱养鱼场,为养殖的1/2,水温24~26e。1.4菌种鉴定收稿日期B2001-04-121对待测菌的64项形态、生理生化特征进行测基金项目B国家自然科学基金资助项目(39870581);国家重点基础研究发展规划/9730资助项目(G1999012004)1定。供试菌株在2216E培养基上活化后分别接种作者简介B王保坤(1976-),男,青岛海洋大学硕士研究生.于各测试培养基。除耐盐性试验、TCBS培养基生*责任作者长和唯一碳源试验外,其他培养基均以陈海水配制,第1期王保坤等B花鲈弧菌病病原菌(哈维氏弧菌)的分离与鉴定53[9~13]测定方法参照有关文献进行。同时还用BI-OLOG鉴定方法[
6、14]对鉴定结果进行确证。表1人工感染试验结果1.5药敏试验Table1ResultsofchallengetestsofSF-1strainbymusclein-用纸片法在普通2216E固体培养基平板上测jection定待测菌株对药物的敏感性。28e培养24h,观测感染剂量/(cfu#ind-1)试验鱼/尾死亡鱼/尾死亡率ChallengedoseTestnos.Deadnos.Mortality有无抑菌圈及其直径大小,根据抑菌圈直径判断标5.0@10325@200[9,15]425@220.04准判断待测菌株对药物的敏感性结果。药敏5.0@10[9,15]5.0@10525@2340.68
7、纸片为上海市医学化验所产品和OXOID公司5.0@10625@2490.98产品。5.0@10725@2501对照Control25@2002结果2.1病原菌的分离及感染试验2.2细菌鉴定从具有明显发病症状的花鲈的病灶组织分离到经形态、生理生化特征鉴定(见表2),SF-1和1株优势菌SF-1,经人工感染试验证实,该菌株对健SF-3的特征基本相同,菌体呈短杆状、极生单鞭毛、康花鲈具有明显的致病作用(
