巴洛沙星片微生物限度检查方法验证试验研究

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1、巴洛沙星片微生物限度检査方法验讦试验研究【摘要】冃的建立巴洛沙星片微生物限度检查法。方法制备1:10、1:100的供试液,采用离心沉淀与薄膜过滤的方法，来测定试验菌的回收率。结果供试品稀釋100倍麻，采用离心沉淀与薄膜过滤法，回收率即可达70%以上。结论可采用离心沉淀与薄膜过滤法消除巴洛沙星的抑菌活性，建立其微生物限度检查法。【关键词】巴洛沙星；验证试验；离心沉淀；薄膜过滤Amethodforvalidationofmicrobial1imittestsofbalofloxacintabletsLENGJia-wei.TheDrugControlTNstitueofShandong,Shan

2、dong250101,China［Abstract］ObjectiveTosetupamethodfordormimingmicrobiallimitsinbalofloxacintablets.Methods1:10,1:100sampletestsolutionwereprepared,andthecentrifugation,membranefiltrationmethodwereapplled.Therecoverywasdetected.ResultsWhenthesampledilution100times,therecoverywasover70%withthemethodof

3、centrifugationandmembrane"Itration.ConclusionAftermethodofcentrifugationcollectionandmembranefiltration,theamountofbacteriaandcontroledbacteriacanbedeterminedinbalofloxacintablets.［Keywords］Balofloxacin;Validation;Centrifuqation;Membrancefiltration巴洛沙星是第三代嗤诺酮类抗菌药，具有广谱的抗菌活性［2］。根据《中国药典》2005年版二部规定所有非规

4、定灭菌制剂及其原料、辅料,在建立其微住物限度检查法之前，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法利控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法是否适合丁该制剂的细菌、霉菌及酵母菌数的测定和控制菌检查方法［门。据此作者对巴洛沙星片的微牛物限度检查法进行了验证试验的研究，建立了巴洛沙星片的微牛物限度检查方法。现报告如下。1仪器与材料1.1仪器BSC-1500IIA2-X生物洁净安全柜；MJ-250I生化培养箱;GHP-9270隔水式恒温培养箱；SartoriusCP225D电子天平;HTY-2000B集菌仪（杭州泰林医疗器械厂生产）；NS01-75D2薄膜过滤器（北京牛牛基因技术有限公司）o1.2培养基营养

5、琼脂培养基（批号:081215）＞玫瑰红钠琼脂培养基（批号:080520）、营养肉汤（批号:070313）＞改良马丁培养基（批号:0810092）、胆盐乳糖增菌液（批号:080117）稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白腺缓冲液（批号：080921）均购于北京三药科技开发公司。1.3药物巴洛沙星片（山东罗欣药业090230）规格：O.lg/片。1.4菌株大肠埃希菌（Eschrichiacoli）［CMCC（B）44102］；枯草芽泡杆菌（Bacillussubtilis）［CMCC⑻63501］；金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）［CMCC（B）26003］；白色念珠菌

6、（Candidaalbicans）［CMCC（F）98001］；黑曲霉（Aspergillusniger）［CMCC（F）98003］均购于中国生物制品检定所医学菌种保藏中心，以上菌种均为第3代菌种。2验证方法与结果1.1菌液制备［1］按《屮国药典》2005年版二部附录“微牛物限度检查法”项下方法制成50~100CEU/ml的菌悬液。2.2供试液制备取供试品10g,研磨加PH7.0无菌氯化钠-蛋白腺缓冲液至100ml,制成1:10的供试液，再稀释成1:100的供试液。取1:100的供试液以500r/min离心3min取上清液，经过滤后备用。2.3菌数计数方法的验证2.3.1细菌数验证方法的预

7、试验1.3.1.1试验组取上述制备好的1:100供试液1ml,按薄膜过滤法处理，用冲洗液分别冲洗滤膜5次，100ml/次。在最后一次冲洗液中分别加入试验菌50~100CFU/ml,取出滤膜分别贴于营养琼脂平板上。将平板置30°C~35°C培养48h,计数。1.2菌液纟R测定加入的每一种试验菌数。1.3供试品对照组按试验组的方法和条件测定供试品的本底数。1.4稀释剂对照组按试验组的方法,加入50〜100CFU/