缢蛏分子遗传学研究进展【文献综述】

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1、毕业论文文献综述生物技术缢蛏分子遗传学研究进展摘要：目前有多种技术被用于缢蛏的分子遗传研究，RAPD、ISSR、AFLP、等技术都对缢蛏的生物分子方面的研究具有显著的作用。三种技术根据不同的原理对缢蛏进行分子遗传研究，具有各自不同的特点并适用于研究。缢蛏的分子遗传研究已经取得了可喜的成绩，同样的也具有着广阔的研究前景。关键词：缢蛏RAPDISSRAFLP群体遗传缢蛏(SinonovaculaconstrictaLamark)隶属软体动物门、瓣鳃纲、异齿亚纲、帘蛤目、竹蛏科，又名蛏子,广泛分布于中国、日本和朝鲜等国的沿海地区。但由于近年海洋环境急剧恶化,同时,随着缢蛏养

2、殖面积的逐年扩大,缢蛏野生种质逐年减少。随着“蓝色革命”时代的迅速发展，海水贝类养殖等相关研究日益兴起，缢蛏为我国四大养殖贝类之一，对它的研究和开发利用受到越来越多的科研工作者的重视。本文就就用于缢蛏分子研究进展加以综述。一、分子遗传学常用的技术1.1RAPD技术1.1.1RAPD技术的原理RAPD（RandomAmplifiedpoiymorphicDNA，随机扩增多态性DNA）技术是由美国杜邦公司的Wwlliams和加里福尼亚生物研究所Welsh领导的两个研究小组于1990年同时提出的一种快速、简便、多态性检出率高、可自动化分析的一项新的DNA分子标记技术,其方法

3、是建立在PCR技术基础上的,它以一系列人工合成的不同的随机排列顺序的寡聚核昔酸单链（通常为十聚体）为引物（Primer）对所研究的基因组总DNA（模板DNA）进行PCR酶促体外扩增,扩增产物通过聚丙烯酞胺凝胶或琼脂糖凝胶电泳分离,经EB染色（或银染或放射自显影）来检验扩增产物DNA片段的多态性。其多态性反映了基因组相应区域的DNA多态性。RAPD分析所用的一系列引物的碱基序列不同,但对任一特定引物,它与所检测DNA(模板DNA)序列有特定的结合位点。当引物在模板的两条链上有互补位置,引物3′端相距在一定长度范围内（一般为200~2000bp）,在DNA多聚酶催化下,就

4、可扩增出DNA片段来。因此,当检测的模板DNA在这些区域发生DNA片段的插人、缺失或引物结合位点上的碱基突变时,PCR产物就会增加、缺少或发生分子量的改变。虽然对每一引物而言,其检测基因DNA多态性是有限的,但可用的引物数很多,可检测区域几乎覆盖整个基因组。所以RAPD可以对整个基因组的DNA进行多态性检测。这就是RAPD检测多态性DNA的原理。1.1.2RAPD的特点RAPD技术不仅继承了PCR效率高、特异性强和检测容易的特点,而且与其他DNA分子标记相比起来,有其独到的优势，利用RAPD建立的遗传图谱,具有以下一些特点(1)RAPD技术可以在对物种没有任何分子生物

5、学研究的情况下,对其进行DNA多态性分析,构建这些物种的基因指纹图谱,并通过统计分析为遗传分析和分类研究提供DNA分子水平的依据,这是其他方法(如RFLP)所不能比拟的(2)此法技术简单,易于操作.它可以直接对生物基因组DNA多态性进行分析,引物的设计是随机的,因而无需做克DNA探针的分离,杂交膜的准备及核苷酸序列分析等前期工作;(3)试验只需少量的DNA，高效灵敏。极少量材料（一片叶子、一段根尖,甚至几个细胞）所含有的DNA即可满足需要,并且不受季节、组织器官发育时期的限制(4)无放射性污染，RADP操作安全,不需用同位素示踪,并且所用试剂毒性小,对人体一般不构成危

6、害(5)较之RFLP标记的遗传图谱更有效,具有更大的标记密度。但它也有缺点,RAPD标记是显性标记,不能区别纯合体和杂合体,从而使它提供的遗传信息不够完整在某些作物中,扩增的稳定性差。这些缺点的克服只有通过严格保证反应条件来解决。1.2ISSR技术1.2.1ISSR-PCR的原理基因组中分布有以2~6bp为单位多次串联重复的微卫星DNA序列,如二核苷酸重复序列AT、GA、CT、AG、AC、TC等,三核苷酸重复序列AGC、ACC、CTC、TAT等,四核苷酸重复序列CCCT、CTAG、GATA等,五核苷酸重复序列CTTCA、GGAGA等。这种分布于常染色质、高度重复的简单

7、序列,称为微卫星DNA(MicrosatellitesDNA),也称简单重复序列(Simplesequencerepeats,SSR)或短串连重复(Shorttandemrepeats,STR)。早在1974年,Skinner等研究寄居蟹基因组的卫星DNA时就发现基因组内存在SSR;Hamada等报道从酵母到脊椎动物,所有真核生物的基因组中均能发现poly(dT-dG)n核心序列的多拷贝短序列;此后Tautz等、Stalling等发现在人、老鼠、鸡及多种植物等真核生物的基因组中广泛存在SSR,其不仅分布于内含子、编码序列及外显子中,也可散布在2个或多