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1、综合性实验项目指导书《微生物工程》编写单位：生命科学学院编写教师：闫训友适用专业：4:物技术编写H期：2011.5」0综合性实验项目名称（黑体，四号，全文1・5倍行距）一、实验项目：液体培养阿魏侧耳发酵液动态变化实验学时：8学时实验类型：（综合）每组人数：5人/组二、实验目的及要求通过本实验的学习，使学生学会液体培养阿魏侧耳的原理和方法，掌握液体培养条件下的无菌技术，掌握液体培养条件下各因子的动态变化，掌握发酵终点的判断及污染处理，为今后从事于微生物发酵奠定基础。）三、实验主要仪器和制剂主要仪器：恒温振荡器、超净工作台、高压灭菌锅、分析天平、电磁炉、分光光
2、度计、移液管等。试剂：蔥酮试剂、3,5-二硝基水杨酸、PDA液体培养基、平姑等四、实验内容（一级标题：黑体，小四号。下同）配制PDA液体培养基，选择长势良好的菌丝，无菌操作挑取数片菌丝，接入液体培养基中，26°C条件下振荡培养，分别取培养0、1、2、3、4、5、6天的培养液，测定发酵液还原糖、总糖、多糖等指标的含量变化，探讨引起指标变化的原因。五、实验实施步骤（-）制备PDA液体培养基1.PDA液体培养基配方：马铃薯20%,蛋白月东0.4%,葡萄糖2%,磷酸二氢钾0.3%,硫酸镁0.15%,pH自然。2•配制、分装、高压灭菌：按照培养基配置的一般方法进行配
3、制液体培养基，并于500mL三角瓶中，分装150mLPDA液体培养基，于121°C下，灭菌30min。（-）接种培养：1.取平板菌丝体，利用接种刀均匀划分等量人小的菌丝体。2.分别在4个装有PDA液体培养基的三角瓶屮，等量接入平菇菌丝体。3.将接有菌种的PDA液体培养基放入27C下培养。（三）取样分别取接种当天、3天、4天、5天、6天、7天的发酵液。（四）指标测定1.还原糖测定按照3,5-二硝基水杨酸的方法。2.总糖测定按照恿酮硫酸比色法测定。3.多糖测肚按照多糖二总糖-还原糖（五）发酵终点的判断按照发酵液颜色、发酵液粘稠度、菌丝状态、还原糖、多糖、总糖的
4、变化进行判断发酵终点。六、思考问题导致液体培养条件下污染的因素有哪些，实验过程中如何避免杂菌的污染，如何正确判断发酵终点？七、实验报告在实验报告要包括实验忖的及要求、实验内容、实验步骤、实验结果与分析,明确实验结果是否与理论相符，如果不符，分析出具体原因及改进措施。八、实验成绩评定办法主要评分点：原理描述、实验步骤、操作过程、实验结杲、对实验结呆的分析，改进措施和注意事项。其中原理描述、实验步骤和操作过程清楚正确的60分，实验结果与分析正确90分，改进措施和注意事项合理完备的100分。设计性实验项目指导书《生物技术综合实验》编写单位：生命科学学院编写教师：
5、闫训友适用专业：生物技术编写H期：2011517□□设计性实验项目名称（黑体,U!号，全文1・5倍行距）一、实验项目：液体培养药用真菌发酵液多糖的提取与纯化实验学时：8学时实验类型：（设计性）每组人数：5人/组二、实验目的及要求通过本实验的学习，使学生学会从发酵液屮提取多糖的原理和方法，掌握液体离心、发酵液处理的技术，发酵液中多糖的纯化方法，掌握冷冻干燥的技术操作，为今后从事于微生物发酵奠定基础。）三、实验主要仪器和制剂主要仪器：离心机、冷冻干燥机、鼓风干燥箱、恒温水浴锅、量筒、烧杯、冰箱等。试剂：95%乙醇10瓶，T业酒精10L,乙瞇2瓶、丙酮2瓶等。四
6、、实验内容（一级标题：黑体，小四号。下同）发酵液离心、发酵上清液的收集、发酵上清液浓缩、发酵液除蛋白、醇沉多糖、多糖的制备、多糖的纯化，多糖的结晶。五、实验实施步骤（-）发酵上清液的制备振荡培养7d后,从摇床中取出三角瓶，将其在4000r/min,20min的条件卜-离心，取其上清液。（-）多糖的提取工艺将离心得到的发酵上清液在不大于90°C的条件下浓缩至原体积的1/4心,浓缩液在4000r/min,20min的条件下离心，在提取剂为乙醇，乙醇浓度为80%,提取温度为80°C,提取时间为2.5h小时条件下提取多糖，再将提取液在4000r/min,20min
7、条件下离心,所得沉淀即为粗多糖。（三）多糖纯化对制备的多糖，经过纯丙酮反复洗涤，离心后得到固体粉末，再经过乙瞇洗涤，洗去色素等杂质，最后得到较好的固体。（四）多糖的干燥对制备的多糖，在冷冻干燥机内进行冷冻T燥。六、思考问题影响液体多糖提取的因素有哪些，实验过程中如何避免减少多糖的得率？七、实验报告在实验报告要包括实验目的及要求、实验内容、实验步骤、实验结果与分析,明确实验结果是否与理论相符，如果不符，分析出具体原因及改进措施。八、实验成绩评定办法主要评分点：原理描述、实验步骤、操作过程、实验结果、对实验结果的分析，改进措施和注意事项。其中原理描述、实验步骤
8、和操作过程清楚正确的60分，实验结果与分析正确90分，改进措施和注
