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1、感冒疏风颗粒的微生物限度检查方法学验证摘要：目的：建立感冒疏风颗粒微生物限度检查方法。方法：按《屮国药典》2010版的要求[1],通过接种代表性的阳性菌株，用常规法、稀释法及薄膜过滤法对五株阳性菌株进行回收率测定。结果：该样品没有抑菌性，常规法、稀释法及薄膜过滤法对五株阳性菌株冋收率均高于70%。结论：本样品细菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌大肠埃希菌均可采用常规法进行检查。关键词：感冒疏风颗粒;微生物限度检查;回收率;方法学验证中图分类号：R284.2文献标志码：A文章编号：1007-2349（2013）08-0059-02感冒
2、疏风颗粒具冇辛温解表，宣肺和中的功能[2]。临床用于治疗风寒感冒，发热咳嗽，头痛怕冷，鼻流清涕，骨节酸痛，四肢疲倦。当建立产品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌数计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定[l]o本文通过接种代表性的五株阳性菌株，采用常规法、稀释法及薄膜过滤法进行微牛物限度检查方法学验证实验，为该样晶建立了微牛物限度检查方法。1仪器与材料1.1仪器HTY-2000A集菌仪（杭州高得医疗器械有限公司）；开放式集菌器（北京牛牛基因技术有限公司,批号:20101005）o1.
3、2样品感冒疏风颗粒(云南雄业制约有限公司，规格/袋，批号20110101,20110102,20110103,20101001,20101105)。1.3培养基和试剂改良马丁液体培养基(批号，1011042),改良马丁琼脂培养基(批号，010315),玫瑰红钠琼脂培养基(批号，110208),营养肉汤培养基(批号,110120),营养琼脂培养基(批号,101224),胆盐乳糖增培养基(批号，101226),北京三药科技开发公司。1.4菌种大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(F)44102]、枯草芽抱杆菌(Ba
4、cillussubtilis)[CMCC(B)63501]、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]、白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]>黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003](中国夯品生物制品检定所提供)2方法按屮国药典2010版一•部微生物限度检查法(附录XIIIC)[1]进行实验。2.1菌液制备取经34°C培养18〜24h,大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽砲杆菌肉汤液体培养物1mL,加入9mL0.9%氯化钠
5、溶液中，10倍稀释至10-5-10-7备用；取经24°C培养18〜24h的白色念珠菌液体培养物1mL,加入9mL0.9%氯化钠溶液屮，10倍稀释至10-6备用；取经培养一周的黑曲霉菌斜面物，加0.9%氯化钠溶液3mL,洗下抱子，转移至另一空管，标准比浊后，取1mL加入0.9%氯化钠溶液中10倍稀释至10-4备用。2.2菌液的检验取上述金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、人肠埃希菌10-5-10-7稀释液各1mL,用45°C营养琼脂培养基20mL注皿，各平行测定两皿，30〜35°C培养48h,计数，应约为50〜100cfu/mL；取上述白色
6、念珠菌10-5-10-6稀释液及上述黑曲霉菌10-4抱子悬液各1mL,用45°C玫瑰红钠琼脂培养基20讥注皿，各平行测定两皿，23〜28°C培养，逐日观察计数，应约为50〜100cfu/mLo结果见表1。2.3供试液制备取样品10mg,加pII7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液100ml,用匀浆议混匀，作为1：10的供试液。2.4冋收率的测定2.4.1细菌数霉菌数常规法测定试验组：取1：10供试液1niL、50~100cfu试验菌同时加入平JJJ1中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24〜72h逐口观察结果。菌液组：测
7、定每一菌株所加的试验菌数（同菌液检验）。供试詁对照组：取1：10供试液1mL加入平皿屮，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24〜72h逐日观察结果，测定供试品本底菌数2.4.2细菌数霉菌数稀释法测定试验组：取1：10供试液0.2mL/皿、50-100cfu试验菌同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24〜72h逐日观察结果。菌液组：测定每一菌株所加的试验菌数（同菌液检验）。2.4.3细菌数霉菌数薄膜过滤法测定取1：10的供试液1mL,注入开放式滤器（先用少量缓冲液润湿滤器），用PII7.0无菌氯化
8、钠-蛋白月东缓冲液冲洗滤膜，每次100mL共4次（每次充分振摇滤器，总冲洗400mL）,留有少量缓冲液加1mL(50〜100cfu)试验菌混匀，抽干后，取出滤膜菌面朝上贴入规定琼脂平板培养基中，置规定温度培养48h,结果见表2。2.5回收率的计算按如下公式计算试
