可见分光光度法和紫外分光光度法教学指导

《可见分光光度法和紫外分光光度法教学指导》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、第+豪看肯甚垃聲葬牽葬家母首页基本要求重点难点讲授学时内容提要1基本要求[TOP]1.1学握分光光度法的基本原理，Lambert一Beer定律以及透光率、吸光度、摩尔吸光系数等基本概念及相互关系。1.2熟悉物质対光的选择性吸收，吸收光谱的意义；可见分光光度法的测定方法一标准曲线法和标准对照法。1.3了解光的基本性质，光的加和性；分光光度计的基本构造；比吸光系数比较法、差示分光光度法和双波长法的测定方法；提髙测量灵敏度和准确度的方法；紫外分光光度法的一般概念。2重点难点[TOP]2.1重点分光光度法原理一Lambert-Beei*定律。2.2难点提

2、高测量灵敏度和准确度的方法。3讲授学时[TOP]建议3学时4内容提要[TOP]第一节第二节第三节第四节第五节4.1第一节物质的吸收光谱当光照射到某物质或某溶液吋，只有光子的能量(/“)•被照射物质粒子的棊态和激发态能量Z差(△◎相等时，才能被吸收。不同物质的基态和激发态的能虽差不同，选择吸收光了的能量也不同，即吸收的波长不同。光的能量与波长成反比，波长越短，能量越高。有色溶液的颜色是它所选择吸收光的补色，吸收越多，则补色的颜色越深。比较溶液颜色的深度，实质上是比较溶液対光的吸收程度。任何一种溶液对不同波长的光的吸收程度是不同的。以波长九为横坐标，

3、吸光度A为纵坐标作图，得到的曲线为吸收光谱。吸收光谱描述了物质对不同波长的光的吸收能力，吸光度最大处的波长为最大吸收波长。不同的物质冇不同的吸收光谱，最大吸收波长也不同，它可以对物质进行初步的定性分析。吸收光谱是分光光度分析中选择测定波长的重要依据。通常选用最大吸收波长为测定波长，具有最高的灵敏度。4.2第二节分光光度法基本原理[TOP]4.2.1透光率和吸光度当一束平行单色光照射到溶液时，若不考虑光的反射，则入射光强度6吸收光强度人，透射光强度为AZl'n]的关系为/()一人+人(13.1)透射光的强度厶与入射光强度A)Z比称为透光率T表示(1

4、3.2)透光率的负对数称为吸光度，用符号A表示。A=-lgT=lg^11(13.3)422Lambert-Beer定律Lambert和Beer研究了吸光度A与液层厚度b和溶液浓度cZ间的定量关系。得出吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘枳成正比。这就是Lambert—Beer定律，是光吸收的呈本定律。A—kbc(13.3)k与被测物质性质、入射光波长、溶剂、溶液浓度及温度有关。当方以cm,c以物质的量浓度(mol-L1)为单位时上称为摩尔吸光系数，以誠示,单位为Lmol^cm1,Lambert一Beer定律可表示为A—ebc(13.5)若用质量浓度/

5、Xg・L“)代替物质的量浓度c,则Lambert一Beer定律町表示为A—abp(13.1)式中的Q为质量吸光系数，单位为L-g^cm^d和£可通过下式相互换算£=gMb(13.7)M表示被测物质的摩尔质最。医药学上还常用比吸光系数来代替摩尔吸光系数。当溶液组成标度为10g-L-'W,可用E蔦表示,它与£和。的关系分别为：(13.2)HE：：：(13.3)Lambert-Beer定律仅适用于单一波长的单色光。£、。或£鬣越大，表明溶液对入射光的吸收就越强，测定的灵敏度就越高。4.3第三节可见分光光度法[TOP]4.3.1分光光度计分光光度法所采川

6、的仪器称为可见分光光度计。棊木部件及相互间的关系如下：4.3.2定量分析方法应用分光光度法定量测定时，入射光一般选择九诳的单色光，常用的定量分析方法冇标准曲线法和标准比较法二种。(%1)标准曲线法配制一系列浓度不同的标准溶液，在九和处分别测量它们的吸光度。以标准溶液的浓度为横处标，相应的吸光度为纵坐标作图，得到一条标准曲线，然后在相同条件卜•测量待测溶液的吸光度，从标准曲线上查得待测溶液的浓度。（二）标准对照法配制一个与被测溶液组成标度相近的标准溶液（浓度为Cj,测得吸光度为久。然后在相同条件下测得被测溶液的吸光度去，根据Lambert-Beer

7、定律计算其试样溶液的浓度cx为:（13.10）4.4第四节提高测量灵敏度和准确度的方法[TOP]4.4.1分光光度法的误差分光光度法的误差主要來源于溶液偏离Beei■定律引起的误差、仪器误差和主观误差。（一）仪器测定误差仪器测定误差是由光电管的灵敏性差、光电流测量不准、光源不稳定及读数不准等因素引起的。（二）溶液偏离Beer定律引起的误差溶液偏离Beei•定律引起的误差表现为不cIlli线的线性较差，常出现弯

8、11

9、。产生这种情况的主要原因有1.化学方而吸光物质不稳定，因浓度改变1佃发生解离、缔合、溶剂化等现彖致使溶液的吸光度改变。2.光学方面入

10、射光的纯度不够，实际上经分光光度计的单色器得到的是一个狭小波长范围的复色光。（三）主观误差山于操作不当引起的误差称为主观误差。应严格按操