微生物限度的检查

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1、文件编号微生物限度的检查颁发部门S0P-QC-007-00总页数执行U期4编制者审核者批准者编制口期审核EI期批准U期1・目的：明确微生物限度检查的标准操作规程，以保障产品质量得到有效的控制。2•范围：成品、半成品。3•责任：QC检测员负责执行，QC主管负责监督。4.内容:4.1总则4.1.1抽样用具的清洁与贮存见微生物检验用器皿准备标准操作程序。4.1.2抽样方法见微生物检查取样标准操作程序。4.1.3供试品在检查前不得开启，检查前和检查中应防止供试中的污染受损、致死或繁殖。4.1.4检查全过程均应严格遵守无菌操作规程，严防再污染。4

2、.1.5控制菌的污染检查应做相应的已知菌对照试验，对照菌为大肠杆菌[CMCC(B)44102],每批试验已知菌加入量为50—100o4.1.6染菌量的检查或控制菌的检查均应做空白对照试验。4.1.7供试品稀释成稀释液后应在均匀状态下取样，凡有抑菌成份或防腐剂的供试品应做特殊处理后进行检验。4.1.8供试品稀释后应在1小时内操作完毕。4.1.9细菌、霉菌检验结果的报告以g.ml为单位的菌落数表示。控制菌检验报告以g或ml为单位报告“检出”或“未检出”。4.2检查法4.2.1细菌、霉菌的染菌量，采用培养皿菌落计数法。4.2.1.1供试液的制

3、备：固体供试品以无菌操作称取10g,置含0.9%氯化钠的生理盐水lOOinl中，振摇溶解，使成1:10稀释度的供试液。然后依次稀释成1:10、1:100、1:1000的供试液。4.1.1.2吸样分別吸取1:10、1:100、1:1000的供试液分别注入2-3个平皿中。4.2.1.3注皿事先将细菌培养基融化，置于45°C水浴中备用。当供试液注入平皿后，用培养基倾注入平皿，每皿约15ml,随即转动平面，使供试液与培养基混匀后置水平台上待凝。4.2.1.4培养将平皿倒置于培养箱中培养。细菌培养30-35°C、48小时；霉菌培养25-28°C>

4、72小时。4.2.1.5菌落计数法细菌先用肉眼观察，点数菌量（霉菌除外），然后持5-10倍放大镜检查有无遗漏。如有片状菌落或花斑样菌落蔓延生长的以及平板受到污染的情况，则该平板计数无效。若平板上有2个或者个以上的菌落重叠，如可分辩，仍以2个或是个以上菌落计数。当一个稀释级用2个平板时,应采用2个平板菌落数的均值为平均平板菌落数。若2个平板菌落数相差1倍以上时，该当稀释级不宜采用（不包括2个平板菌落数均在15个以下的情况）点计后，计算各稀释级的平均平板菌落数按菌数报告规则报告。4.2.2控制菌的检查4.2.2.1检查步骤：按增菌、分离、纯

5、化培养、革兰氏镜检检与生化鉴别等项试验进行。4.2.2.2大肠杆菌检查法取供试液10ml（供试品lg、1ml）于100ml胆盐乳糖，增菌培养液内，置36±1°C.18-24小时培养，如增菌注呈现混浊、表而可见或未见气泡都表明有菌生长，如混浊不明显，可延长培养时间至48小时。取其增菌培养物划线，接种于伊红美兰琼脂培养皿中，置36±1°C、18-24小时培养，如无菌落生长，可判为：未检出大肠杆菌。若有菌生长或疑似者，应挑选2-3个菌落，继续做染色镜检和乳糖发酵试验。4.3细菌检查：4.3.1细菌菌落形态细菌菌落是一个菌细胞或菌细胞团在局限位

6、置上，经一定条件下繁殖成肉眼可见的细菌群体，外观湿润或干燥，表面光滑或折皱，外缘整齐或缺陷。4.3.2霉菌菌落形态具有放射或树枝样分枝的菌丝是霉菌菌落的特征。初形成时多无色透明，成熟的霉菌菌落有各种颜色的砲子形成。4.3.3大肠杆菌菌落形态在EBM琼脂平板上的典型菌落呈紫黑色或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，带有金属光泽。非典型形态，在EBM琼脂平板上呈浅紫、粉紫、粉色，无明显的暗色中心，应做为疑似菌进行鉴定。4.4对照试验4.4.1阴性对照试验：检验试验全过程无菌技术的可靠性。4.4.1.1菌数测定阴性对照试验分别吸取生

7、理盐水1ml置于无菌平皿中，分别按细菌、霉菌测定方法注皿、培养，不得长菌。4.4.1.2控制菌检查阴性对照试验吸取生理盐水lml于增菌液中，按控制菌检查方法检查不得长菌。4.4.2阳性对照试验：检查供试品是否对控制菌生长产生干扰作用及检查培养条件是否适宜。4.4.2.1方法：于供试液中加入一定量的相应对照菌，做平行试验。4.4.2.2规定阳性对照菌株为大肠杆菌［CMCC(B)44102］。对照菌的加入量为50-100个，可事先预试确定。4.4.2.3用计数方法，取37°C培养费8-20小时的新鲜肉汤培养物10倍递增稀释至10°，取其0.

8、lml于普通肉汤琼脂板表面涂抹或取107稀释液lml以少于皿法进行测定。4.4.2.4当供试品未检出菌时，而阳性对照试验也未能检出，则不能做出供试品未检出控制菌的结论。4.4.2.5阳性对照试验操作必须与供