微生物限度检查SOP

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1、题目微生物限度检查SOP标准编号QC/P-011/01共11页第1页制定部门质检屮心复制号起草人日期2010年09刀10H审核人日期2010年09月11日批准人日期2010年09刀19日颁发部门质量管理部发布日期2010年09月19日实施日期2010年10月01日变更记录修订号发布日期实施日期变更原因及目的002006年04月19日2006年05月08日首次发布012010年09月］9日2010年10月01日根据2010版药典修分发单位生产部（)质量管理部（质检中心（)动力设备部（)固体制剂车问（)注射剂车间（)物供部（)人力资源部（)行政办公室（)销

2、售部1)计财部（)1适用范围：本规程规定了微生物限度检查方法及操作要求，适用于本公司检品的微生物限度检查。2责任人：质检中心生测组检验员。3仪器、设备：超净工作台恒温培养箱生化培养箱显微镜高压蒸气消毒器洒精灯无菌衣、裤、帽、口罩消毒鞋刻度吸管(1ml、10ml)具塞试管(20ml)三角瓶(100ml)平皿(4)90mm)乳钵银子接种环棉花洗耳球除菌滤器抽滤瓶(1000ml)微孔滤膜(W0.45um)恒温干燥箱4试验前的准备工作4.1用具的包扎：4.1.1刻度吸管：在刻度吸管上端管内，松松地塞进少许棉花，然后分别用纸严密卷好，再取一层消毒布与牛皮纸包好。

3、4.1.2用布袋将洗净晾干的无菌衣、裤、帽、口罩、配套装入，扎紧口袋，再用牛皮纸包扎好。4.1.3每批样准备20个清洁的4)90mm平皿，用消毒布和牛皮纸包扎好。4.1.4滤器：将微孔滤膜先在水中浸泡湿润,取出后固定在细菌滤器的滤板上。滤板上、滤膜下均用耐高温梨圈埜好，上好滤器。滤器的螺旋灭菌前勿拧太紧，滤器上口用8层纱布及牛皮纸包扎，装妥后放入瓷盒内，再将盛滤器的瓷盒盖好盖子，用牛皮纸包扎。4.2用具的灭菌：无特殊要求,请参照《卧式圆形压力蒸气消毒器SOP》操作。4.3洁净室的消毒及检测：无特殊要求,请参照《洁净室清洁SOP》、《沉降菌取样SOP》操

4、作。4.4培养基的配制：请参照商品T燥培养基使用说明书规定方法配制，测试其pH值，应符合规定，否则应校正。5细菌、霉菌及酵母菌计数5.1计数培养基的适用性检查5.1.1菌种:⑴大肠埃希MECMCC(B)44102]5.金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]6.枯草芽胞杆菌[CMCC(B)63504]⑷白色念珠菌(CMCC(F)98001)(5)黑曲霉(CMCC(F)98003)5.1.2菌液的制备：5.1.2.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、桔草芽胞杆菌的新鲜培养物至营养肉汤屮；接种生砲梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基屮，30-35°C培养

5、18-24小时。2..1.2.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁基培养基中，23-28°C培养24-48小时。5.2.1.2.3分别取上述菌悬液，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至与5.1.4项下的菌液浊度标准管相同的浓度，然后作10倍系列稀释，制成50-100cfu/m1的菌悬液。5.1.2.3接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面基培养基上，23-28°C培养5-7天，加入3-5ml0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数小于lOOcfu(菌落形成单位)的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23〜28°C培养5〜7天，加入3

6、〜5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将砲子洗脱。然后吸出抱子悬液(用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释与5.1.4项下的菌液浊度标准管相同的浓度，然后作10倍系列稀释，制成每lml含50-lOOcfu的菌悬液。5.1.3菌液制备后若在室温下放置，应该在2小时内使用；若保存在2-8°C,可在24小时内使用。5.1.4菌液浊度标准管的配置照卜•表，根据硫酸和氯化顿的比例來具体配置。管号0.5123450.25%BaCl2(

7、ml)0.20.40.81.21.62.0l%H2SO4(ml)9.89.69.28.88.48.0细菌的近似浓度(xlO8/ml)136912155.1.5适用性试验取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽他杆菌各50-lOOcfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备两个平皿，混匀，凝固，置30-35°C培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50-lOOcfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23-28°C培养72小时，计数;取白色念珠菌50-100cfu,注入无菌

8、平皿中,立即倾注酵母浸出粉月东葡萄糖琼脂培养基，平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23-28°C