毒理学实验指导

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1、毒理学实验指导《食品毒理学》实验指导实验一半衰期的测定■比色法测定水杨酸钠的血浆半衰期实验二兔血液红细胞计数实验三四氯化碳对家兔肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)的影响实验水所需实验仪器：电子天平、水浴锅、pH计(试纸)、显微镜、分光光度计、离心机、一次性注射器。1实验一半衰期的测定■比色法测定水杨酸钠的血浆半衰期一、原理、目的药物血浆半衰期tl/2即血浆药物浓度下降一半所需的吋间。绝大多数药物是按一级动力学规律消除(恒比消除)，因此每种药物都有固定的tl/2,不因血浆浓度高低而改变。本实验用分光光度法测定水杨酸钠的血浆浓度并计算tl/2o水杨酸钠为抗炎药，经肝代

2、谢，在酸性环境中与三氯化铁生成一种紫色的络合物，在520nm波长下比色，其光密度与水杨酸浓度成正比。通过测定水杨酸钠的血浆半衰期，使学生了解水杨酸钠在体内的消除速度，并掌握其血浆半衰期的测定方法。半衰期是判断毒物蓄积程度的重要参数，对中毒和解毒有一定的实践意义。二、试剂、器材及动物离心管、试管、磅秤、玻璃棒、注射器、吸管、离心机、721型分光光度计；三氯醋酸、水杨酸钠、三氯化铁；兔。三、方法步骤1、取离心管和试管各5支，分别标为1~5号，备用。5支离心管各加入10%三氯醋酸7mlo2、収兔1只，称体重，从耳静脉取血2ml置入1号离心管，用玻璃棒搅拌。然而自耳静脉注入10%水杨

3、酸钠(剂量为150mg/kg),并立即和60min后两次自另一耳静脉取血2ml,分别注入2、3号离心管中，搅拌。4、5号离心管分别加入蒸谓水和0.02%水杨酸钠2mlo3、取上述5支离心管进行离心(2000r/min,5min),准确吸取上清液6ml放入编号相对应的试管中，分别滴入10%三氯化铁12滴(0.6ml)摇匀5min后比色。4、用721型分光光度计520nm波长比色，以4号管调“0”，读得5号管光密度为X,再以1号管调“0”，读得2号管为xl,3号管为X2,将上述操作归纳为下表：水杨酸钠血浆半衰期的测定试管名编号对照立即60min空白标准5、计算半衰期%1求k值：k

4、=y/x;y=0.02%1求水杨酸钠血浓度：给药后立即血浓度yl=kxl；给药后60min血浓度y2=kx2o③根据下列公式求半衰期:12345三氯醋酸(ml)77777兔血0.02%水杨酸钠蒸镭水(ml)(ml)(ml)2222□夕离心上清液三氯化铁(ml)(gtt)666661212121212tl/2=四、结果结果测定5号管光密度(x)2号管光密度(xl)3号管光密度(x2)tl/22实验二血液红细胞、白细胞计数A【红细胞计数】红细胞计数(redbloodcellcount,RBC)是指计算每升血液内所含红细胞的数目。红细胞计数的方法有显微镜计数法、血沉管计数法、光电比

5、色法、血细胞电子计数器计数法等。目前在临床上使用最广泛的是显微镜计数法（计数板法）。一、原理血液经稀释后，充入血细胞计数板，用显微镜观察，计数一定容积内的红细胞数并换算成每口I内的数目。二、器材1、改良式血细胞计数板：临床上最常用的是改良纽巴（Neubauer）氏计数板，它是由一块特制的玻璃板构成，玻璃板中间有横沟将其分为三个狭窄的平台，两边的平台较中间的平台高0.1mmo中央平台又有一纵沟相隔，其上各刻有一个计数室。每个计数室划分为9个大方格，每一大方格面积为1.0mm2,深度为0.1mm；四角每一大方格划分为16个屮方格,为计数白细胞用。中央一大方格用双线划分为25个中方

6、格，每个中方格乂划分为16个小方格，共计400个小方格，此为红细胞计数之用。2、血盖片：专用于计数板的盖玻片呈长方形，厚度为0.4mm。3、沙利氏（shali）吸血管或红细胞稀释管，5ml吸管、中试管。4、显微镜，计数器等。5、稀释液：0.85%氯化钠溶液。三、方法试管稀释法用5ml吸管吸取红细胞稀释液3.98ml（或4ml亦可）置于试管中。用沙利氏吸血管吸取全血样品至20M刻度处（或吸血至刻度10处，红细胞稀释液用2ml）o擦去吸管外壁多余的血液，将此血液吹入试管底部，再吸、吹数次，以洗出沙利氏管内粘附的血细胞,然后试管口加塞，颠倒混合数3次，再用毛细吸管（或玻棒）吸取已稀

7、释好的血液，放于计数室与盖玻片接触处，即可自然流入计数室屮。注意充液不可过多或过少，过多则溢出而流入两侧槽内，过少则计数池中形成气泡，致使无法计数。计数时，先用低倍镜，光线要稍暗些，找到计数室的格后，把中央的大方格置于视野之中，然后转用高倍镜。在此中央大方格内选择四角与最中的五个中方格（或用对角线的方法数五个中方格），每个中方格有16个小方格，所以共计数80个小方格。计数时注意压在左边双线上的红细胞计在内，压在右边双线上的红细胞则不计数在内；同样，压在上线的计入，压在下线的不计入，此所谓“数左不数右，数