兽药大鼠传统致畸试验指导原则

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1、兽药大鼠传统致畸试验指导原则一、概述<-）定义与目的传统致畸试验是通过观察药物对母体子宫内的胚胎或胎儿产生的薛作用.包括外观、内脏和骨骼陶形.对药物的胚胎毎性进行评价的一种方法.母体在孕期受到可通过胎盘屏障的菜种有宮物质作用，彩响胚胎的器官分化与发育，导致結构和机能的缺陷，出现胎儿腐形.因此.在受孕动物的胖胎瑞床后.并已开始进入细胞及器官分化期时给予受试药物，可检出受试药物对胎儿的致崎作用"为了确保大鼠致购试验结果的兵实性、可靠性和可追潮性，根据新■药研究的规律，结合国内轉药竈理学评价的实际情况制定了本指导原則.（二）适用范围本规程适用于

2、兽用化学药品、中善药、消那剂及饲料药物添加刑的大段致鮒作用测定.二、试鲨设计（-）材料与方法1.实验动物选择SPF级健廉性成熟（90〜lOOd）大风.未交配过的靑年雌取80〜90只，俺就减半.2.药品和试剂（1）受试物（2）阳性对照物可选用敌枯双［NN■甲撑•双（2•氨基-134囉二哇）.MATDA）,要求分析纯以上，含厦不低于98J%・给药剂董为0.5〜1.0mg/kg体重.经口给予.另外阳性对照物还可选用五氯酚钠（30mg/kg体重）、阿斯匹林（250〜300mg/kg体乘）及維生素A（7・5~13mg/kg体霾）等.（3）试刊：甲莊

3、、冰乙战、2.4,6•三硝基粉、氢氧化钾、甘油、水合氯醉、茜泰红・（4）其他试液茜素红上备液冰乙5.0mL,甘油lO.OmL.1%水合篡醛60.0mL配成混合液，取适量茜我红边加边復拌，直至饱和为止.置榇色瓶中保存.齿素红应用液取曲素红贮备液ImL,加1%氢氧化钾溶液稀释至lOOOmL,置棕色瓶中•临用时配制・透明液A甘油20mL・2%氢氧化钾溶液3mL,加蒸憎水至100mL混合.透明液B甘油50mL,2%氢氧化钾溶液3mL,加蒸tS水至100mL混合.固定液（Boui血液）2.4,6-三硝基酚（苦味酸〉饱和液75份、甲醛20份、冰乙酸5

4、份混合.3.仪器设备生物显微镜及体视显微镜游标卡尺（百分尺〉实脸空梵它常用设备（二）试验步骤1.剂■组设计役3-5个试验组.另外设一个阴性（溶剂）对照姐和一个阳性对照组.试验组高剂量原测上应便部分孕斂（和/或胎效）出现毒性作用，如体重域轻帛低剂星不应引起基性作用，各组可采用1/4、1/16、1/WLDw等剂Jt・急性毒性试验给予动物受试药物量大剂量（量大使用浓度和最大淞胃容量）无死亡时.以30天唱养试验的绘大未观察到有害作月剂量为高剂fit・以下设2〜4个剂5L毎组至少保证】2只孕肌・2.受孕臥检責性成熟雌、挂大取按1:1（或2:1）同宠

5、后，母日早晨观察阴栓（或阴道涂片），以査出阴栓（或从阴道涂片中观察到梢子）确认雌啟己交配，将该堆竄作为试验用就，并以当日作为“受孕"零天・连续将雌、雄大帆进行同笼交配.反复检査雌亂的受精情况，宜到检岀的“受巒6T数足以进厅试验・，如集5天内筠未交配，则更换堆孔动物交配以空温20-25X?为宜.环墳应安孰必耍时蚁以麦芽、蛋桂等营养物质。3.试验动物称重、标记编号和分组不斷将同一天检杳确认的“受穩亂”进厅称重、标记編号，采用完全随机法分组・直到各组“受粘歐'达12只以上.4.致突变阳性对照物及受试药物溶液配制（1）阳性对照物Z确龙阳性对照物种

6、类及其给于刑量（參见“（一）2.（1）”）・按0.5〜1.0mL/100g体貳给予大鼠受试药物灌胃容童，计算阳性对照物溶液帝配制的浓度.拟定需配制的体枳，计算配制溶液时需称取阳性刈照物的量.（2）受试药物配制根据受试药物理化性质，选定港剂，将受试药物配制成水溶淞（或乳化剂、浪悬液、糊状软等）・必要时加入增涪剂或助悬剂（如吐隘・80、淀粉、竣甲基纤维素钠等）・各剂量组受试药物溶液可采用倍比稀释法配制・根据设计的受试药物刑园，按大取灌胃容it耍求，确定高剂量徂（即第I剂n组）受试药物溶液希配制的浓度以及各剂楚组所需受试药物溶液体积，再拟定第1

7、剂尼组受试药物初始溶液希配制的体积，计算雋称取/豪取受试药物的风・5.给药方案采用经口港胃给药.从受孕的第7天~第16天，1次/d,连续10d・分别在受孕的第0日、第7日、第12日、第16日及第20日对孕鼠进行称重，按大鼠潅胃容址耍求，调整各时段受试药物涪液酒胃盘。6.临床观察在试验期问险査记录妊娠大貳的摄食、饮水及第玄情况・观察妊娠大fit的一般行为衰现、中潯及死亡情况.1.孕取的处死及检査于奸嫌笫20天称取孕肌体更・断头处死孕鼠，剖股取出卵巢、子言，检査黄体数、吸收胎数、死胎数、活胎数，活胎取雌雄比，胎載在子宫内位置，称取卵與貳、子宫

8、连胎K血（包括羊水）、子宫政等.&活胎載检査测■活胎鼠的休•:.体长.更长.检连活胎凯外观喊形.胎亂体农检査项目见表1・9.胎骨标本制作与检查（1）胎骨标本制作将毎寰一半的活胎放入95%乙醉屮