1骨髓染色检查

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1、1骨髓染色检查红河州第一人民医院检验科质量管理体系文件SOP文件1•仪器OLYMPUS显微镜2方法骨髓细胞学检查应抽取骨髓少量制成薄片。采用骨髓小粒丰富、制片厚薄均匀的涂片，经瑞氏一姬姆萨混合染色后，于显微镜下检查细胞质和量的变化。3•试剂3.1.瑞氏染色液：瑞氏染粉18g,置洁净干操的研钵内,加甘油3.5ml,研磨片刻，使瑞氏染粉充分溶解，加甲醇50ml,继续研磨片刻后，收集上层染液；残余部分再加甲醇50ml研磨：再收集上层染液，重复几次后，用甲醇冲洗研钵，倒入同一瓶内，最后加甲醇至500mlo开始几周应经常振摇染色液。染色液存放的时间越长，染色效果也越佳。此外，研蘑时染粉内

2、应先加甘油，以免染粉在研磨过程中结成块，更易溶解。染粉未经研磨配成的染液不宜用作骨髓片染色。3.1.姬姆萨浓缩染液：将姬姆萨染粉3.8g放入纯甘油250ml屮，置60°C水浴2小时，溶解后加60°C预热的甲醇250ml混匀，于室温、棕色瓶内保存，配后数天即可使用，可长期保存。3.2.pH6.5磷酸盐缓冲液：磷酸二氢钾1・5g,磷酸氢二钠1・0g、加蒸憾水到5000mlo最后纠正pH6・5。3.3.姬姆萨稀释液：取姬姆萨浓缩溶液50ml,加pH6・5磷酸盐缓冲液到500ml,混匀。此液为姬姆萨应用液，可直接作涂片复染用。作瑞氏稀释液时，取此液10—20mL加蒸憾水至100ml,混

3、匀即可。4.材料3.1.消毒骨髓穿刺包：骨髓穿刺针（16号、14号）；10ml注射器（干燥）；7号针头；纱布；孔巾；橡皮手套；3.2.2%碘酒、75%酒精、棉球；3.3.5ml:0.1g盐酸利多卡因；3.4.推片、载玻片。5•操作（以骼后上棘为例）5.1•骨髓抽取:5.1丄病人侧卧，两腿向胸部弯曲，腰紙部向后突出，在骼后上棘处做记。1)在标记处用碘酒、酒精作螺旋状由内而外消毒，戴消毒手套将孔巾盖于已消毒的局部，孔巾孔口对准穿刺部位。2)注射5ml:O.lg盐酸利多卡因麻醉局部皮肤、皮下组织并至骨膜,按摩注射处至药液扩散为止。3)以左手姆指和食指将穿刺部位两侧皮肤压紧固定，右手持

4、穿刺针与背再面垂直，旋转刺入骼后上棘，达骨髓腔时有空松感。编写：杨松钱审核：黄萱批准：白云辉页码：1红河州第一人民医院检验科质量管理体系文件SOP文件4)取出针芯，接10ml干燥注射器抽取，到骨髓液出现即止。5)拨下注射器而复插入针芯，将骨髓液注在一玻片上供涂片用，再出穿刺针，压迫伤口数分钟使止血，敷以消毒纱布。52制片：用推玻片沾取少量（相当于5ul）骨髓液于栽玻片上以适当的角度（30-45度）用力均匀推制出厚薄均匀的涂片。6•注意事项1)骨髓取材：取材部位有胸骨、棘突、骼骨前悄或后烤等。两岁以内小孩最好用胫骨，成人常取骼后上棘，此部位穿刺方便，病人也易接受.穿刺前要求严格消

5、毒，杜绝细菌感染，除穿刺室紫外线消毒和皮肤消毒外，还应注意穿刺包和手套消毒时间有否过期。戴手套要熟练，避免手套接触未消毒物品。穿刺针进入髓腔时常有脱空感，吸取前针筒内应留有lml左右的空隙,否则髓液很快进入针筒空隙而无法取出。针筒内若有水份也要用消毒纱布擦干，以免溶解细胞。吸液量一般控制在0.2ml左右。因吸量过多，易被外周血稀释。部分病人干抽或吸出量太少时，不要将针头立即拔出，可边抽边调节针头深浅，或边抽边缓慢外移针头，最后将针头内可能残留的髓液尽量推出、制片，以减少病人痛苦。1)染色选两块小粒较多、厚薄均匀的骨髓片，自然干燥后在较厚的头端髓膜上写上病人姓名、日期及“BM”标

6、记。加瑞氏染色液8—12滴，用吸球吹吸并使其布满整张涂片，约半分钟后，加姬姆萨稀释液5J0滴，再用吸球吹吸气，使两液充分混匀，若有金黄色油膜出现，染色效果更佳。染色时间一般为10-20分钟，夏天可缩短些、冬天则可延长些。冲洗时应平放玻片让流水缓慢冲洗。另外，因手拿玻片处可能会有染料残留，应更换手拿位置再予冲洗。染色太淡的涂片，可用姬姆萨稀释液复染3分钟；着色太深时，可用瑞氏染液滴加于涂片上，立即冲洗即可。各实验室最好能摸索出自己的染色经验，尽量做到一次性染色成功。没有姬姆萨染液的单位，可用蒸储水加少量天青（或美蓝）代替，但染色效果没有前者好。染好的涂片要自然干燥，切忌加热烘干，

7、否则细胞退色而影7.分析耍点7丄骨髓片观察的内容：•肉眼观察涂片有无骨髓小粒、脂肪滴，制片、染色是否良好。・低倍镜下观察骨髓增生情况(主要分为5级)，标本有否稀释，并计数全片的巨核细胞，了解有无特殊异常细胞。・高倍镜下观察巨核细胞形态及巨核细胞分类计数(一般被分类的巨核细胞应不少于25个)，并进一步观察低倍镜下看到的可疑细胞。•油镜下明确在低、高倍镜发现的异常或可疑细胞的性质，并作骨髓细胞分类和全面的细胞形态分析。编写：杨松钱审核：黄萱批准：白云辉页码：2红河州第一人民医院检验科质量管理体系