胡萝卜组培实验报告

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1、本科学生综合性实验报告学号：姓名：学院：生命科学学院专业、班级：班实验课程名称：胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养实验教师：开课学期：至学年学期填报时间：年月日云南师范大学教务处编印一．一．实验设计实验序号实验一实验名称胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养实验实验时间2013年3月-6月实验室325实验内容：实验1-1MS培养基母液的配制与保存实验1-2MS固体培养基配制实验1-3胡萝卜肉质根愈伤组织诱导培养（初代培养）实验1-4胡萝卜愈伤组织培养实验

2、1-5胡萝卜愈伤组织继代增殖培养实验1-6胡萝卜细胞悬浮培养实验1-7胡萝卜愈伤组织器官分化培养一．实验目的1-1：使学生能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。1-2：通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。1-3：使同学能够熟练掌握外植体的表面消毒技术和无菌操作技术，并且基本掌握愈伤组织的诱导培养。1-4：使同学熟练掌握愈伤组织培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术。1-5：使同学熟练掌握愈伤组织继代增殖培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技

3、术。1-6：使同学熟练掌握胡萝卜细胞悬浮培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术。1-7： 使同学了解胡萝卜愈伤组织器官分化培养的基本操作技术。二、实验原理、实验流程1.实验原理植物细胞全能性是植物组织培养的细胞基础。生活的植物细胞只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的全部遗传信息，在适当条件下，这些信息可以表达，再生成一个完整植株。1-1：培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质。配制培养基时，为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差，以及避免多种营养成分混合

4、导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高。1-2：将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。1-3：将胡萝卜的贮藏根（根的变态）表面消毒后切割成小块接种于愈伤组织诱导培养基上，诱导外植体脱分化产生愈伤组织。1-4：将胡萝卜肉质根诱导产生的愈伤组织，在无菌操作室中切取长势好的愈伤组织部分转接到

5、胡萝卜愈伤组织培养基中，进行胡萝卜愈伤组织培养。1-5：将胡萝卜愈伤组织转接到愈伤组织继代增殖培养基上培养，即可实现愈伤组织的增殖。1-6：将增殖的大量胡萝卜愈伤组织转接到胡萝卜悬浮培养基中进行培养。1-7：将增殖的大量胡萝卜愈伤组织转接到胡萝卜愈伤组织器官分化培养基中培养。2.实验流程（1）实验总体流程：MS培养基母液的配制与保存MS固体培养基配制胡萝卜肉质根愈伤组织诱导培养（初代培养）胡萝卜愈伤组织培养胡萝卜愈伤组织继代增殖培养胡萝卜细胞悬浮培养胡萝卜愈伤组织器官分化培养（2）MS培养基母液的配制与保存流

6、程：大量元素母液的配制微量元素母液的配制有机成分母液的配制铁盐母液的配制植物生长调节物质母液的配制放入冰箱保存（3）MS固体培养基配制流程：培养基各种物质的混合定容调整PH：6培养基分装培养基封口培养基灭菌培养基保存备用（2）胡萝卜肉质根愈伤组织诱导培养（初代培养)流程：外植体表面灭菌前的准备工作实验材料的准备器械及实验者的消毒灭菌、植物材料的表面灭菌和接种(5)胡萝卜愈伤组织培养流程：器械及实验者的消毒灭菌剥离愈伤组织诱导培养所得的愈伤组织胡萝卜愈伤组织接种（6）胡萝卜愈伤组织继代增殖培养流程：器械及实验者

7、的消毒灭菌胡萝卜愈伤组织培养所得愈伤组织接种于胡萝卜愈伤组织继代增殖培养的培养基中器械及实验者的消毒灭菌（7）胡萝卜细胞悬浮培养流程：胡萝卜愈伤组织继代增殖培养所得愈伤组织接种于胡萝卜细胞悬浮培养的培养基中，在摇床中震荡(8)胡萝卜愈伤组织器官分化培养流程：器械及实验者的消毒灭菌胡萝卜愈伤组织继代增殖培养所得愈伤组织接种于胡萝卜愈伤组织器官分化培养的培养基中三、实验设备及材料1、实验材料新鲜的胡萝卜贮藏根2、实验设备（1）主要用具与仪器：烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、pH试纸（pH5.4~

8、7.0），冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、超净工作台、恒温培养箱、摇床、电磁炉、果酱瓶、高压蒸汽灭菌锅、封口膜、棉线、酒精棉球、已灭菌滤纸、镊培养架等。（2）主要药品和试剂：盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸